用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)实用新型专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201820176594.5 (22)申请日 2018.02.01 (73)专利权人 上海海洋大学 地址 201306 上海市浦东新区沪城环路999 号 (72)发明人 吕利群孙萌王浩周书亭 刘宇斯 (74)专利代理机构 上海伯瑞杰知识产权代理有 限公司 31227 代理人 曹莉 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) (ESM)同样的发明创造已同日申请发明专利 (54)实用新型名称 用于快速检测II型鲤疱疹病毒的R

2、PA检测试 剂盒 (57)摘要 本实用新型公开了用于快速检测II型鲤疱 疹病毒的RPA检测试剂盒， 包括： 包装盒、 内含正 向引物和反向引物的RPA反应液管、 阳性对照管、 阴性对照管、 试纸条装置、 至少1个反应容器和至 少1个反应架； 其中， 所述试纸条装置包括试纸条 体和试纸条盖， 所述试纸条体包括侧向流动免疫 层析试纸条， 试纸条自下而上依次为反应区、 质 控区和检测区， 质控区和监测区外侧设置有透明 的聚乙烯材料外壳， 且外壳靠近反应区的端部设 置有螺纹， 并与试纸条盖螺纹连接； 上述RPA检测 试剂盒检测速度快、 时间短， 效率高， 便于携带， 适合早期兽医临床检测。 权利要求书

3、1页 说明书3页 附图2页 CN 207944113 U 2018.10.09 CN 207944113 U 1.用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒， 其特征在于， 包括： 包装盒(1)、 内 含正向引物和反向引物的RPA反应液管(4)、 阳性对照管(5)、 阴性对照管(6)、 试纸条装置 (7)、 至少1个反应容器(10)和至少1个反应架(11)用于检测时放置所述试纸条装置(7)； 其 中， 所述试纸条装置(7)包括试纸条体(8)和试纸条盖(9)； 所述试纸条体(8)包括侧向流动免疫层析试纸条； 所述的试纸条自下而上依次为反应 区、 质控区和检测区， 所述的质控区和监测区外侧设置

4、有透明的聚乙烯材料外壳； 且所述外 壳靠近反应区的端部设置有螺纹， 并与所述试纸条盖(9)螺纹连接。 2.如权利要求1所述用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒， 其特征在于， 所 述反应容器(10)为透明聚乙烯材料， 且可与所述试纸条体(8)外壳靠近反应区端部的螺纹 进行连接。 3.如权利要求1所述用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒， 其特征在于， 所 述试纸条体(8)检测时与所述反应容器(10)螺旋连接， 并置于所述反应架(11)内。 4.如权利要求1所述用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒， 其特征在于， 所 述阳性对照管(5)内含有ORF72质粒。 5.如

5、权利要求1所述用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒， 其特征在于， 所 述阴性对照管(6)内含有无菌ddH2O。 权利要求书 1/1 页 2 CN 207944113 U 2 用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒 技术领域 0001 本实用新型涉及检测试剂盒， 具体涉及用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测 试剂盒。 背景技术 0002 疱疹病毒性造血器官坏死病(herpesviral haematopoietic necrosis,HVNV)是 一种鲫鱼的高致病性病， 其病原体为II型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)， 鲫鱼患上这

6、种病后， 体表出血， 伴随眼球和腹部膨胀， 内脏器官严重出血， 鳔壁斑点状突出， 该病毒致死率高达90以上， 而且存在垂直传播的情况， 感染该病毒后鱼的鱼苗和鱼卵中 都能发现该病毒。 该种病毒的传统检测方法大都存在特异性和敏感性差、 操作繁琐、 费时费 力等缺点， 不能满足兽医临床现地检测需要。 0003 重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是利用重组酶和单链结合蛋白在常温下协同实现引 物与模板的特异结合， 以代替传统PCR热循环中变性和复性过程的新型恒温体外核酸扩增 技术。 RPA与侧向流动免疫层析技术(LFD)相结合的方法具有判断结果肉眼可判读， 检测方 便， 反应时间在10min内， 便于携带

7、等优点， 其反应原理是羧基荧光素(FAM)标记的特异探针 与生物素(Biotin)标记的核酸扩增产物特异性结合， 将其滴加于试纸条上便会与胶体金标 记的抗FAM的抗体结合， 形成三元复合物， 当扩散到检测线时， 三元复合物被生物素配体捕 获， 形成有颜色的检测线。 RPA检测手段操作简单、 反应快速、 检测成本低、 结果确实可靠， 用 于II型鲤疱疹病毒的快速检测快速、 可靠， 且应用前景广阔。 实用新型内容 0004 为克服现有技术的上述缺陷， 本实用新型的目的在于提供一种用于快速检测II型 鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒。 0005 本实用新型的上述目的通过以下技术方案实现： 0006 用于

8、快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒， 包括： 包装盒、 内含正向引物和 反向引物的RPA反应液管、 阳性对照管、 阴性对照管、 试纸条装置、 至少1个反应容器和至少1 个反应架用于检测时放置所述试纸条装置； 其中， 所述试纸条装置包括试纸条体和试纸条 盖； 所述试纸条体包括侧向流动免疫层析试纸条； 所述的试纸条自下而上依次为反应区、 质 控区和检测区， 所述的质控区和监测区外侧设置有透明的聚乙烯材料外壳； 且所述外壳靠 近反应区的端部设置有螺纹， 并与所述试纸条盖螺纹连接。 0007 优选地， 所述反应容器为透明聚乙烯材料， 且可与所述试纸条体外壳靠近反应区 端部的螺纹进行连接。 00

9、08 优选地， 所述试纸条体检测时与所述反应容器螺旋连接， 并置于所述反应架内。 0009 优选地， 所述阳性对照管内含有ORF72质粒。 0010 优选地， 所述阴性对照管内含有无菌ddH2O。 0011 优选地， 所述RPA反应液管包括正向引物、 反向引物、 酶、 Rehydration Buffer、 醋 说明书 1/3 页 3 CN 207944113 U 3 酸镁和水。 0012 需要说明的是， 上述技术方案中， 试纸条体的里层为侧向流动免疫层析试纸条， 当 试纸条的反应区放入反应容器内进行反应时， 因为检测结果是由下往上跑， 所以设计至少 一个反应架用于放置螺旋连接好的试纸条体和反

10、应容器观察试验结果， 判定是否有II型鲤 疱疹病毒， 既直观又便捷、 卫生， 且不影响结果的正确判断。 0013 与现有技术相比， 本实用新型具有如下有益效果： 0014 (1)检测速度快， 效率高， 适合于早期检测； 0015 (2)检测时间短， 方便快捷； 0016 (3)易于鉴定， 肉眼即可观察结果； 0017 (4)便于携带， 局限性小， 适合兽医临床检测。 附图说明 0018 图1为本实用新型的结构示意图； 0019 图2为本实用新型中试纸条装置的结构示意图； 0020 图3为本实用新型中反应容器的结构示意图； 0021 图4为本实用新型中反应架的结构示意图； 0022 其中， 1-

11、包装盒， 2-内衬， 3-盒盖， 4-RPA反应液管， 5-阳性对照管， 6-阴性对照管， 7-试纸条装置， 8-试纸条体， 9-试纸条盖， 10-反应容器， 11-反应架。 具体实施方式 0023 下述结合附图对本实用新型进一步描述。 0024 参见附图1-4所示， 用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒， 包括： 包装盒 1、 内含正向引物和反向引物的RPA反应液管4、 阳性对照管5、 阴性对照管6、 试纸条装置7、 至 少1个反应容器10和至少1个反应架11用于检测时放置试纸条装置； 其中， 试纸条装置7包括 试纸条体8和试纸条盖9； 0025 试纸条体8包括侧向流动免疫层析试纸

12、条， 试纸条自下而上依次为反应区、 质控区 和检测区， 质控区和监测区外侧设置有透明的聚乙烯材料外壳， 且外壳靠近反应区的端部 设置有螺纹， 并与试纸条盖9螺纹连接； 反应容器10为透明聚乙烯材料， 且可与试纸条体8外 壳靠近反应区端部的螺纹进行连接。 0026 阳性对照管5内含有ORF72质粒， 阴性对照管6内含有无菌ddH2O， RPA反应液管4内 除包括正向引物、 反向引物外， 还包括酶、 Rehydration Buffer、 醋酸镁和水。 0027 当上述RPA检测试剂盒使用时， 将模板(DNA)2ul以及RPA反应液管4中的液体48ul 加入反应容器10内， 在37下加热10min

13、， 再把试纸条装置7的试纸条盖9旋开露出反应区， 通过螺纹连接放入加热后的反应容器10中， 等待5min观察结果。 当试纸条体8内出现两条条 带， 一条位于质控区内， 一条位于检测区， 则结果为阳性， 表明样本中含有II型鲤疱疹病毒； 当试纸条只有质控区出现一条条带， 检测区没有条带， 则结果是阴性， 表明样本中不含有II 型鲤疱疹病毒。 0028 试纸条体的里层为侧向流动免疫层析试纸条， 当试纸条的反应区放入反应容器内 进行反应时， 因为检测结果是由下往上跑， 所以设计至少一个反应架用于放置螺旋连接好 说明书 2/3 页 4 CN 207944113 U 4 的试纸条体和反应容器观察试验结果， 判定是否有II型鲤疱疹病毒， 既直观又便捷、 卫生， 不影响结果的判断。 0029 本实用新型不局限于上述具体实施方式公开的内容， 凡是不脱离本实用新型所公 开的精神下完成的等效或修改， 都落入本实用新型保护的范围。 说明书 3/3 页 5 CN 207944113 U 5 图1 图2 说明书附图 1/2 页 6 CN 207944113 U 6 图3 图4 说明书附图 2/2 页 7 CN 207944113 U 7