连作黄瓜、西瓜枯萎病的生物防治菌株及其微生物有机肥料.pdf

1、(10)授权公告号 CN 101696390 B (45)授权公告日 2010.12.08 CN 101696390 B *CN101696390B* (21)申请号 200910233576.1 (22)申请日 2009.10.29 CGMCC No.3308 2009.09.22 C12N 1/14(2006.01) A01P 3/00(2006.01) C05G 3/00(2006.01) C05G 3/04(2006.01) C05F 17/00(2006.01) C12R 1/885(2006.01) (73)专利权人 南京农业大学资产经营有限公司 地址 210095 江苏省南京市童

2、卫路 6 号南京 农业大学资产经营有限公司 (72)发明人 沈其荣 陈立华 杨兴明 徐阳春 冉炜 黄启为 沈标 (54) 发明名称 连作黄瓜、 西瓜枯萎病的生物防治菌株及其 微生物有机肥料 (57) 摘要 本发明涉及连作黄瓜、 西瓜枯萎病的生物 防治菌株及其微生物有机肥料， 属于农业集约 化生产技术。本发明分离到了对黄瓜、 西瓜枯 萎病有显著生物防治作用的木霉 (Trichoderma harzianum)SQR-T037， 利用该生物防治菌株与有 机堆肥制成微生物有机肥料， 肥料中含有 1108 个 /g 以上该菌株的菌落形成单位、 全氮含量为 3 5 (90以上为有机氮 )， 总氮磷钾养分

3、为 6 10、 有机质含量为 30 35。试验表明， 这种微生物有机肥料施入土壤后能够使生物防治 菌株迅速繁殖， 在土壤中形成优势群， 在黄瓜、 西 瓜枯萎病发生严重土壤中枯萎病生物防治率达 85以上。在还没有形成连作障碍的土壤上长期 施用本微生物有机肥料对黄瓜、 西瓜枯萎病防治 率达 80以上。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 审查员 曾繁辉 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 2 页 CN 101696390 B1/1 页 2 1.一种连作黄瓜、 西瓜枯萎病的生物防治菌株， 该菌株SQR-T037属于哈茨木霉(Tr

4、ich oderma harzianum)， 2009 年 9 月 22 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心， 菌种保藏号为 CGMCC No.3308。 2. 用权利要求 1 所述生物防治菌株所生产的微生物有机肥料。 3.根据权利要求2所述的微生物有机肥料， 其特征在于 ： 该肥料中分别含有1108个/ g 以上的生物防治菌株 SQR-T037 的菌落形成单位、 全氮质量比含量为 4 5， 全氮中质量 比 90以上为有机氮， 总氮磷钾养分质量比为 6 10、 有机质质量比含量为 30 35。 4. 权利要求 2 或 3 所述微生物有机肥料的生产方法， 包括 ： 1) 将权利

5、要求 1 所述的菌株 SQR-T037 接种到 PDA 培养液， 进行液体发酵生产， 其发 酵生产的条件为 ： 初始 pH 范围为 6.5-7.2， 培养温度 25-30， 溶氧 ： 通气量体积比范围为 30 100， 170 转 / 分钟， 发酵时间为 48 小时， 发酵后期将菌丝球全部打碎成该菌株的菌 落形成单位， 发酵液中该菌株的菌落形成单位 1109个 /mL， 所用 PDA 培养液配制方法 为， 以配制 1L 培养基为例 ： 用 200g 土豆削皮后切成小块放到水里煮， 沸腾后煮 30min， 经过 滤后滤液中加 20g 普通蔗糖， 定容至 1000ml， pH 值调至 6.5-7.

6、0， 121灭菌 20min ； 2) 将 SQR-T037 发酵液按 50L/ 吨的接种量分别接种到腐熟的畜禽粪便堆肥、 菜粕微生 物酶解混合物中进行固体发酵， 发酵温度为 30-50， 发酵过程中每天翻堆 1 次， 发酵 5-7 天后结束， 获得生物防治菌株 SQR-T037 的固体菌剂， 其中该菌株的菌落形成单位含量达到 1108个/g以上， 菜粕微生物酶解混合物制备方法为， 将保藏号为CGMCCNO.1543的嗜麦芽 寡养单胞菌(Steno trophomonas maltophilia)菌株37-1发酵液加入到菜粕原料中， 调节 含水量 55-65和 pH6.0-7.5， 进行开放式

7、固体发酵， 待发酵温度上升至 50时立即开始翻 堆， 以后每天翻堆， 使堆温始终维持在35-50约5-7天， 固体发酵开始后， 堆物的pH会不断 上升， 每次翻堆时用含酸液体调节含水量和 pH， 使它们分别维持在 55-65和 6.0-7.0， 发 酵终止时再用含酸液体进行喷洒， 直至堆物 pH 调整为 5.0 左右， 再进行低温干燥或自然凉 干， 即为菜粕的微生物酶解混合物 ； 3) 将畜禽粪便堆肥的 SQR-T037 固体菌剂按体积比 50-80与菜粕微生物酶解混合物 的 SQR-T037 固体菌剂按体积比 20-50的比例充分混合， 后熟 2-3 天， 后熟过程中翻堆 2 次， 最后在温

8、度不超过 50的条件下将微生物有机肥的含水量蒸发至 30以下， 包装出厂 即为防除连作黄瓜、 西瓜枯萎病的微生物有机肥料。 5. 根据权利要求 4 所述微生物有机肥料的生产方法， 其中步骤 (2) 所用腐熟后的畜禽 粪便堆肥为发芽指数 98以上， 有机质质量比含量 35， 有机氮质量比含量为 1.2-2， 含水量质量比 25-30。 6. 权利要求 2 或 3 所述微生物有机肥料在防治连作黄瓜、 西瓜枯萎病中的应用。 权 利 要 求 书 CN 101696390 B1/7 页 3 连作黄瓜、 西瓜枯萎病的生物防治菌株及其微生物有机肥 料 一、 技术领域 0001 本发明涉及连作黄瓜、 西瓜枯萎

9、病的生物防治菌株及其制成的微生物有机肥料， 属于农业集约化生产技术领域， 专用于克服和消除连作黄瓜、 西瓜枯萎病问题。 二、 背景技术 0002 黄瓜和西瓜是我国重要的经济作物， 其产量高低和质量的优劣关系着国计民生。 黄瓜、 西瓜枯萎病是黄瓜和西瓜的主要病害之一， 尤其在保护地种植中危害严重。黄瓜的 枯萎病于 1943 年首次在荷兰报道， 在 1949 年曾经使美国弗罗里达州黄瓜损失 40以上， 连作的第三个季节植株的感染率达到 70以上。目前， 在我国高度集约化的黄瓜、 西瓜产 地， 枯萎病发病严重时产量损失 90左右。黄瓜、 西瓜枯萎病是一种土传性真菌病害， 该病 广泛分布于全世界的热带

10、、 亚热带和一些温暖的地区。黄瓜、 西瓜枯萎病致病菌 - 镰刀菌 (Fusarium oxysporum) 能通过土壤、 流水 ( 灌溉等 )、 种子等方式传播， 对环境有很强的适 应能力。镰刀菌侵染化黄瓜， 会造成黄瓜出土前或者出土后的猝倒病， 顶端的茎蔓萎蔫， 植 株的茎基部维管束坏死， 然后整株枯萎。 镰刀菌会导致西瓜苗期的猝倒、 皮层的腐化和植株 矮化， 会导致较老的植株的突然或者逐渐的萎蔫。在高温高湿的条件下， 病害发展迅速， 发 病严重的田块发病率达 100， 造成绝收。 0003 另一方面， 水稻、 小麦、 玉米、 油菜等作物秸秆就地焚烧、 规模化养殖后的畜禽粪便 随地弃置等不仅

11、严重污染了环境， 也极大地浪费了能作为有机肥和生物有机肥产品的原 料 ； 大量的养分资源 (C、 N、 P、 K、 S 及微量元素 ) 流失于土壤 - 植物系统之外， 明显地削弱了 我国农业可持续发展的能力。 如何将从土壤中因收获作物取走的营养元素最大限度地归还 到土壤中去， 唯一的途径就是将这些固体有机废弃物制成商品有机肥， 再施入土壤。 如果将 这些固体有机废弃物经过高温发酵合成高品位的有机堆肥， 再用于功能菌的载体， 所制成 的微生物有机肥料功能明确， 将会有很好的应用前景。 三、 发明内容 0004 1. 技术问题 0005 本发明的目的在于研制一种能防除黄瓜、 西瓜枯萎病的拮抗微生物

12、有机肥料， 大 田防治效率达到 80以上， 使连作障碍土壤得到生物修复， 确保集约化农业的顺利发展。 0006 2. 技术方案 0007 用于防除连作黄瓜、 西瓜枯萎病的生物防治菌株， 该菌株 SQR-T037 属于哈茨木霉 (Tri choderma harzianum)， 2009 年 9 月 22 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心， 菌种保藏号为 CGMCC No.3308， 主要生物学特性为 ： 在 PDA 培养基上 最佳 的生长温度是 30， 培养时间为 96 个小时的时候， 菌落直径可达 90mm， 布满整个平皿， 在 培养基中产生黄色的色素。分生孢子梗呈瓶状，

13、 对生， 分生孢子椭圆型， 长 2.3-3.5m， 宽 2.0-3.2m， 表面光滑， 孢子的颜色开始的时候是黄绿色， 然后慢慢的变成深绿色。 说 明 书 CN 101696390 B2/7 页 4 0008 用上述生物防治菌株所生产的防除连作黄瓜、 西瓜枯萎病的微生物有机肥料， 该 肥料中生物防治菌株 SQR-T037 菌落形成单位 1108个 /g 以上、 全氮质量比含量为 4 5， 全氮中质量比 90以上为有机氮， 总氮磷钾养分质量比为 6 10、 有机质质量比含 量为 30 35。 0009 所述防除连作黄瓜、 西瓜枯萎病的微生物有机肥料的生产方法， 包括 ： 0010 1) 将 SQ

14、R-T037 接种到 PDA 培养液， 进行液体发酵生产， 其发酵生产的条件为 ： 发 酵初始 pH 范围为 6.5-7.2， 培养温度为 25-30， 溶氧 ： 通气量范围为 30 100， 170 转 / 分钟， 发酵时间为 48 小时， 发酵后期将菌丝球全部打碎成该菌株的菌落形成单位， 发酵液 中SQR-T037菌株的菌落形成单位1109个/mL ； 所用PDA培养液配制方法为(以配置1L 培养基为例 ) ： 用 200g 土豆削皮后切成小块放到水里煮， 沸腾后煮 30min， 经过滤后滤液中 加 20g 普通蔗糖， 定容至 1000mL， pH 值调至 6.5-7.0， 121灭菌 2

15、0min。 0011 2) 将 SQR-T037 发酵液按 50L/ 吨的量分别接种到腐熟的畜禽粪便堆肥和菜粕微 生物酶解混合物中进行固体发酵， 发酵温度为 30-50， 发酵中每天翻堆 1 次， 发酵 5-7 天 后结束， 使该菌株的菌落形成单位含量达到1108个/g以上， 获得生物防治菌株SQR-T037 的固体菌剂 ； 所用腐熟后的畜禽粪便堆肥为发芽指数 98以上， 有机质含量 35， 有机 氮含量为1.2-2， 含水量25-30。 菜粕微生物酶解混合物制备方法为， 将保藏号为CGMCC NO.1543 的嗜麦芽寡养单胞菌 (Steno trophomonas maltophilia)

16、菌株 37-1 发酵液加入 到菜粕原料中， 调节含水量 55-65和 pH6.0-7.5， 进行开放式固体发酵， 待发酵温度上升 至 50时立即开始翻堆， 以后每天翻堆， 使堆温始终维持在 35-50约 5-7 天， 固体发酵开 始后， 堆物的 pH 会不断上升， 每次翻堆时用含酸液体调节含水量和 pH， 使它们分别维持在 55-65和6.0-7.0， 发酵终止时再用含酸液体进行喷洒， 直至堆物pH调整为5.0左右， 再进 行低温干燥或自然凉干， 即为菜粕的微生物酶解混合物。 0012 3) 将畜禽粪便堆肥的 SQR-T037 固体菌剂按体积比 50-80与菜粕微生物酶解混 合物的 SQR-T

17、037 固体菌剂按体积比 20-50的比例充分混合， 后熟 2-3 天， 后熟过程中翻 堆 2 次， 最后在温度不超过 50的条件下将微生物有机肥的含水量蒸发至 30以下， 包装 出厂即为防除连作黄瓜、 西瓜枯萎病的微生物有机肥料。 0013 所述微生物有机肥料可专用于防除连作黄瓜、 西瓜枯萎病。 0014 3. 有益效果 0015 本发明一种能克服或消除连作黄瓜、 西瓜枯萎病的微生物有机肥料及其生产方 法， 利用畜禽粪便堆肥和菜粕的微生物酶解氨基酸混合物， 再与生物防治菌株液混合后制 成微生物有机肥料， 其产品与目前市场上的产品相比具有如下优点 ： 0016 1) 该肥料产品中含有抑制黄瓜、

18、 西瓜枯萎病病原真菌生长的高效菌株 ( 哈茨木 霉 )， 其抑制效果非常显著。试验结果表明， 在连作黄瓜、 西瓜枯萎病的土壤上施用本产品 后， 黄瓜、 西瓜枯萎病大田生物防治率达 85以上， 连续三年施用本肥料的土壤， 枯萎病的 生物防治率更高。 0017 2) 该肥料为生物有机肥， 含有丰富的有机质 ( 含量 30-35 )， 有机氮含量为 3-5。 本产品总磷含量为2-4， 而且生物有效性特别高， 使用本产品后能使作物顺利度过 苗期磷素敏感期。相比之下， 含磷化肥施入土壤后生物有效性较差。生物有机肥料中含有 的丰富营养也为其中的生物防治菌株提供了生长繁殖的条件， 使在土壤中存活下来并形成

19、说 明 书 CN 101696390 B3/7 页 5 优势群， 从而发挥防病作用。 0018 3) 由于是生物菌株制剂， 完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题， 因而 有利于黄瓜和西瓜的无公害生产， 农民可以不用或减少其他防治枯萎病化学农药的用量， 这不仅可为农民节省开支， 而且有利于农产品的质量。同时， 该微生物肥料还有增产功能， 可为农民增加收入。 四、 附图说明 0019 图 1 ： 生物防治菌株 SQR-T037 的抑制黄瓜、 西瓜枯萎病病原菌的效果 0020 A SQR-T037 抑制黄瓜枯萎病病原菌的效果图 0021 B SQR-T037 抑制西瓜枯萎病病原菌的效果图 00

20、22 图 2 ： 温室盆栽试验防治效果 0023 A SQR-T037 制成的生物有机肥抑制黄瓜枯萎病效果 0024 CK1： 对照 ； CK2： 黄瓜连作土壤 ； T1： CK2+ 有机肥 ； T2： CK2+ 木霉 SQR-T037 的发酵液 ； T3： CK2+ 木霉 SQR-T037 的混合有机肥 ； T4： CK2+ 木霉 SQR-T037 发酵的有机肥 0025 B SQR-T037 制成的生物有机肥抑制西瓜枯萎病效果 0026 CK1： 对照 ； CK2： 西瓜连作土壤 ； T1： CK2+有机肥 ； T2： CK2+木霉SQR-T037发酵有机肥 五、 具体实施方式 0027

21、( 一 ) 菌株的分离和鉴定 0028 采集已经发生连作障碍并出现严重枯萎病病症的植株和周围土壤， 样 品低温保存， 采用镰刀菌的选择行培养基分离病原菌 - 尖孢镰刀菌黄瓜专化型 (Fusariumoxysporum f.sp.cucumerinum)和尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)。然后以分离到的枯萎病病原菌为指示菌， 从来自于经过高温堆置的有机堆 肥中， 采用木霉的选择性培养基分离生物防治菌株。再通过盆栽试验和大田试验最终复筛 出高效生物防治菌株 SQR-T037， 鉴定到种， 菌种于 PDA 培养基 4保存和室温保存。生物防 治菌株

22、SQR-T037 能够在 72 小时完全抑制病原菌的生长 ( 图 1)。 0029 菌株SQR-T037属于哈茨木霉(Trichoderma harzianum)， 主要生物学特性为 ： 在PDA培 养基上最佳的生长温度是 30， 培养时间为 96 个小时的时候， 菌落直径可达 90mm， 布满整个平 皿， 在培养基中产生黄色的色素。分生孢子梗呈瓶状， 对生， 分生孢子椭圆型， 长2.3-3.5m， 宽 2.0-3.2m， 表面光滑， 孢子的颜色开始的时候是黄绿色， 然后慢慢的变成深绿色。 0030 ( 二 ) 菌剂生产 0031 1) 将 SQR-T037 接种到 PDA 培养液中， 进行液

23、体发酵生产， 其发酵生产的条件为 ： 初始 pH 范围为 6.5-7.0， 培养温度 25， 溶氧 ： 通气量范围体积比为 30 100， 170 转 / 分钟， 发酵时间为 48 小时， 发酵后期将菌丝球全部打碎成该菌株的菌落形成单位， 发酵液 中 SQR-T037 菌株的菌落形成单位 ( 菌丝片段 ) 1109个 /mL ； 0032 所用 PDA 培养液配制方法为 ( 以配制 1L 培养基为例 ) ： 用 200g 土豆削皮后切成 小块放到水里煮， 沸腾后煮 30min， 用纱布过滤后， 滤液加 20g 普通蔗糖， 定容至 1000ml， pH 值调至 6.5-7.0， 121灭菌 20

24、min。 0033 2) 将生物防治菌株 SQR-T037 发酵液按 50L/ 吨的接种量接种到腐熟的猪粪堆 说 明 书 CN 101696390 B4/7 页 6 肥和菜粕的微生物酶解混合物进行固体发酵， 发酵过程中每天翻堆 1 次， 使固体发酵温度 30-50， 发酵 5-7 天后结束， 使生物防治菌株的菌落形成单位含量达到 1108个 /g 以上， 获得生物防治菌株SQR-T037固体菌剂。 所用腐熟后的猪粪堆肥为发芽指数98以上， 有机 质含量 35， 有机氮含量为 1.2-2， 含水量 25-30。 0034 其 中 菜 粕 的 微 生 物 酶 解 混 合 物 制 备 方 法 为 (

25、 公 知 公 用， 见 发 明 专 利 ZL200610086126.0， 一种农用氨基酸的生物制取方法及其肥料产品 )， 将嗜麦芽寡养单胞 菌 (Stenotrophomonas maltophilia) 菌株 37-1 发酵液加入到菜粕原料中， 调节含水量 55-65和 pH6.0-7.5， 进行开放式固体发酵， 待发酵温度上升至 50时立即开始翻堆， 以 后每天翻堆， 使堆温始终维持在35-50约5-7天， 固体发酵开始后， 堆物的pH会不断上升， 每次翻堆时用含酸液体调节含水量和 pH， 使它们分别维持在 55-65和 6.0-7.0， 发酵终止 时再用含酸液体进行喷洒， 直至堆物pH

26、调整为5.0左右， 再进行低温干燥或自然凉干， 即为 菜粕的微生物酶解混合物 ( 含氨基酸的混合材料 )。 0035 3) 将猪粪堆肥的 SQR-T037 固体菌剂按体积比 80与菜粕微生物酶解混合物的 SQR-T037 固体菌剂按体积比 20充分混合， 后熟 2-3 天， 后熟过程中翻堆 2 次， 最后在温度 不超过 50的条件下将微生物有机肥的含水量蒸发至 30以下， 获得防除连作黄瓜、 西瓜 枯萎病的微生物有机肥。 0036 上述所生产的 SQR-T037 经过再次发酵的微生物有机肥 ( 防除连作黄瓜、 西瓜枯 萎病的微生物有机肥料 ) 中生物防治菌株 SQR-T037 的菌落形成单位

27、1108个 /g 以上、 全 氮质量比含量为 4 5， 全氮中质量比 90以上为有机氮， 总氮磷钾养分质量比为 6 10、 有机质质量比含量为 30 35。 0037 ( 三 ) 温室盆栽试验 0038 1. 连作黄瓜土壤的枯萎病防治 0039 试验土壤为连作土壤， 枯萎病发病严重。黄瓜品种采用种植面积较大的黄瓜品种 “津春 4 号” 。处理如下 ： 0040 CK1： 对照 ； CK2： 黄瓜连作土壤 ； T1： CK2+ 有机肥 ； T2： CK2+SQR-T037 的发酵液 ； T3： CK2+SQR-T037 与有机肥简单混合微生物有机肥 ； T4： CK2+SQR-T037 与有机肥

28、经过再次发酵 形成的微生物有机肥 0041 每处理采用 5 个重复， 10kg 病土 / 盆， T2每盆施 10mlSQR-T037 的发酵液， T3施用 20gSQR-T037 混合的微生物有机肥料 (10mlSQR-T037 的发酵液与 20g 有机肥简单混合 )， T4 施用 20gSQR-T037 发酵的微生物有机肥， 搅拌混合均匀， 使生物防治菌株在土壤中的浓度 达到 105cfu/g 干土。黄瓜苗移栽后 5 天开始记录发病情况， 40 天后， CK2发病率达 98.9， 而接种 SQR-T037 发酵液、 SQR-T037 混合微生物有机肥或者 SQR-T037 再次发酵的微生物有

29、 机肥的都能有效降低枯萎病的发病率， 其中 T4： CK2+SQR-T037 与有机肥经过再次发酵形成 的微生物有机肥表现出最好的防治效果 ( 表 1， 图 2A)， 发病率为 7.3。 0042 2. 连作西瓜土壤的枯萎病防治。 0043 试验土壤为连作土壤， 枯萎病发病严重。处理如下 ： 0044 CK1： 对照 ； CK2： 西瓜连作土壤 ； T1： CK2+ 有机肥 ； T2： CK2+SQR-T037 与有机肥经过再 次发酵形成的微生物有机肥 ； 0045 每处理采用 10 个重复， 每重复 300g 病土 / 杯， T1每杯施用 3g 普通有机肥， T2施 说 明 书 CN 101

30、696390 B5/7 页 7 用 3gSQR-T037 再次发酵的有机肥， 搅拌混合均匀， SQR-T037 在土壤中的浓度为 105cfu/ g 干土。西瓜苗移栽后 5 天开始记录发病情况， 21 天后， CK2发病率达 95.38， 而 T2： CK2+SQR-T037 与有机肥经过再次发酵形成的微生物有机肥能有效降低枯萎病的发病率， 将 其控制在 2.60 ( 表 2， 图 2B)。 0046 结果表明， 生物防治菌株 SQR-T037 的施入， 不但可以起到防治黄瓜、 西瓜枯萎病， 大大减少土壤中枯萎病原菌 (F.oxysporum) 数量的作用， 促进黄瓜、 西瓜根际微生物群落 的

31、变化， 有益细菌群落显著增加， 真菌总体数量及病原菌数量显著减少 ( 表 3)， 还能使黄 瓜、 西瓜的叶绿素含量、 根系活力和干物量显著增加 ( 表 1、 表 2)。 0047 施入生物防治菌株后， 黄瓜和西瓜的系统抗病性相关酶的酶活显著提高 ( 表 4)。 0048 ( 四 ) 田间试验 0049 2008 年在江苏省宜兴市黄瓜枯萎病发病的大田施用 SQR-T037 有机肥。 0050 大田试验处理 ： 1、 施用有机肥 ； 2、 施用 SQR-T037 与有机肥经过再次发酵形成的微 生物有机肥。将枯萎病发病严重的一块田以随机的方式划分成 8 个小区， 每个处理随机选 取四个小区。黄瓜品种

32、为 “津春 4 号” ， 肥料都采用穴施， 生物有机肥施入量为 30kg/ 亩。 0051 定期到田间采集数据， 统计发病率和微生物区系， 最后采收后计算其不同处理间 生物量的差异。施入 SQR-T037 与有机肥经过再次发酵形成的微生物有机肥可以显著地减 少枯萎病害的发生， 降低发病率 33.1， 黄瓜产量增加 1.3 倍 ( 表 5)。 0052 2007 年在河南通许西瓜枯萎病发病严重的大田施用微生物有机肥。 0053 大田试验处理 ： 1、 施用有机肥 ； 2、 施用 SQR-T037 与有机肥经过再次发酵形成的微 生物有机肥。选择枯萎病发病严重的田块， 将田块以随机的方式划分成 8

33、个小区， 每个处理 随机选取四个小区。 西瓜品种为8424， 肥料都采用穴施， 生物有机肥施入量按30kg/亩田。 0054 定期到田间采集数据， 统计发病率、 病情指数和微生物区系， 最后采收后计算其不 同处理间生物量的差异。施入 SQR-T037 发酵的生物有机肥可以显著地减少枯萎病害的发 生， 与当地习惯施肥相比 ( 非嫁接苗 )， 发病率减少 20-40， 防治率达 95以上， 西瓜亩产 增加 1200 斤以上 ( 表 5)。 0055 本发明专利从微生物区系这一关键问题着手， 研制出一种能显著消除连作黄瓜、 西瓜枯萎病发生的微生物有机肥料产品， 防治率达 85以上 ( 大田试验 )。

34、本肥料产品的 作用机制在于本肥料产品提供的功能菌及其有效碳和有效氮源给连作障碍土壤有益微生 物区系的培育提供了很好的条件， 使之迅速恢复和建立外源有益功能菌微生物的生态及其 食物链 ； 另一方面， 本肥料产品中含有较高含量的有机氮和有机磷， 这些营养物质对连作障 碍土壤中作物的生长十分有利， 大大提高了黄瓜、 西瓜等作物的立苗率和抗逆能力。 0056 表 1 不同盆栽处理黄瓜叶片叶绿素含量、 根系活力和植株的干重 0057 处理 发病率() 叶绿素含量 (SPAD) 根系活力 (mg TTC g-1h-1) 植株干重 (g) CK1 0 35.271.52 0.240.04 26.873.06

35、 CK2 98.9 27.930.69 0.110.02 12.775.77 T1 93.3 30.071.17 0.140.04 16.703.06 T2 25.6 35.273.00 0.330.04 30.860.65 T3 4.4 39.670.94 0.400.05 34.832.57 T4 0 46.801.68 0.600.03 36.611.26 说 明 书 CN 101696390 B6/7 页 8 0058 表 2 不同盆栽处理西瓜叶片叶绿素含量、 根系活力和植株的干重 0059 处理 发病率() 叶绿素含量 (SPAD) 根活力 (mg TTC g-1h-1) 植株干重

36、(g/ 杯 ) CK1 0 63.381.98 0.350.06 1.320.02 CK2 95.38 56.011.18 0.150.03 0.680.01 T1 81.27. 61.115.26 0.210.04 0.870.03 T2 2.60 92.282.23 0.500.05 3.030.35 0061 注 ： 枯萎病发病率统计按照国际通行规则 ： 0， 植株健康 ； 1， 植株 10部分萎蔫 ； 2， 植株11-20萎蔫 ； 3， 植株21-50萎蔫 ； 4， 植株50-100萎蔫 ； 5， 植株死亡。 计算公式 ： 0062 0063 表 3 不同盆栽处理黄瓜根表微生物的含量差异 0064 0065 表 4 不同处理间根部抗病性相关酶的活力的变化 0066 说 明 书 CN 101696390 B7/7 页 9 0067 表 5 大田试验效果 0068 说 明 书 CN 101696390 B1/2 页 10 图 1 说 明 书 附 图 CN 101696390 B2/2 页 11 图 2 说 明 书 附 图