20R拟人参皂苷F11及其提取方法和其药物用途.pdf

1、10申请公布号CN101967170A43申请公布日20110209CN101967170ACN101967170A21申请号201010271061322申请日20100903C07J17/00200601A61K31/7048200601A61P9/0620060171申请人吉林圣亚医药科技有限公司地址133700吉林省敦化市华康大街10号72发明人李平亚刘金平卢丹刘传贵杜秀娟李丰74专利代理机构吉林长春新纪元专利代理有限责任公司22100代理人魏征骥54发明名称20R拟人参皂苷F11及其提取方法和其药物用途57摘要本发明涉及20R拟人参皂苷F11及其提取方法和其药物用途，属于新化合物及其

2、药物用途。取西洋红参粉碎，加36倍量的7095乙醇加热回流提取37次，每次24小时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH901101530；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O50703050；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。20R拟人参皂苷F11在制备抗心律失常药物中的应用。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书7页附图4页CN101967170A1/1页21一种如下式的20R拟人参皂苷F11分子式C42H72O14，分子量8005化学名6OL吡喃鼠李糖基12D吡喃葡萄糖基达玛20R，24R

3、环氧3，6，12，25四醇。2一种如权利要求1所述的20R拟人参皂苷F11的提取方法其特征在于包括下列步骤取西洋红参粉碎，加36倍量的7095乙醇加热回流提取37次，每次24小时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH901101530；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O50703050；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。3一种如权利要求2所述的20R拟人参皂苷F11的提取方法其特征在于包括下列步骤取西洋红参粉碎，加4倍量的90乙醇加热回流提取6次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEO

4、H9015；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O5030；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。4如权利要求1所述的20R拟人参皂苷F11在制备抗心律失常药物中的应用。权利要求书CN101967170A1/7页320R拟人参皂苷F11及其提取方法和其药物用途技术领域0001本发明涉及20R拟人参皂苷F11及其提取方法，和其在制备抗心律失常药物中的应用。背景技术0002心律失常是一种常见疾病。据调查，每4个人当中就有1个人患有心律失常。心律失常可以造成心慌、失眠、气短、乏力等症状，还有可能诱发其它心脏病，甚至造成猝死。可以说，心律与生命健康紧密相连。心律失常发生机制十分复杂，与重构心肌离

5、子通道病变、钙载体连接蛋白表达和参与动作电位调节的蛋白发生改变有关。其诱发因素可为药物毒性，电解质、酸碱平衡紊乱，缺血缺氧，神经内分泌素失调以及物理压力等。0003药物一直是防治快速心律失常的主要手段，奎尼丁应用已近百年，普鲁卡因胺应用也有50年历史。60年代，利多卡因在心肌梗死室性心律失常中得到广泛的应用。到80年代，普罗帕酮、氟卡尼等药物的应用，使I类药物发展到了顶峰。90年代初，心律失常抑制试验CAST试验以安慰剂组为对照，研究恩卡尼、氟卡尼、莫雷西嗪对无症状或轻微症状的室性心律失常的抑制能否减少心肌梗死后的猝死率。结果显示，恩卡尼、氟卡尼组的死亡率显著高于安慰剂组，莫雷西嗪会增加早期死

6、亡率，药物各组心血管事件及致心律失常发生率高于安慰剂组。分析认为其主要原因为药物过度延长动作电位，延缓传导，诱发恶性心律失常；其负性肌力作用可恶化心功能，增加致命性心律失常发生率。CAST结果公布，人们注意到在心肌梗死后伴室性期前收缩的患者中，应用I类药物虽可使室性期前收缩减少，但总死亡率上升。由此引起了人们重视抗心律失常药物治疗的效益与风险关系。0004近20年来，新型抗心律失常药物研发滞后，目前还没能找到有效治疗缓慢性心律失常的药物，传统抗心律失常药物的毒副作用反而日益明显，不仅具有严重的心脏外毒性，而且有可能引发新的心律失常，甚至使原心律失常症状进一步恶化。新的抗心律失常药物的开发非常紧

7、迫。发明内容0005本发明提供一种20R拟人参皂苷F11及其提取方法和其药物用途。0006一种如下式的20R拟人参皂苷F110007说明书CN101967170A2/7页40008分子式C42H72O14，分子量8005；0009化学名6OL吡喃鼠李糖基12D吡喃葡萄糖基达玛20R，24R环氧3，6，12，25四醇。0010本发明20R拟人参皂苷F11的其提取方法是0011取西洋红参粉碎，加36倍量的7095乙醇加热回流提取37次，每次24小时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH901101530；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O507030

8、50；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。0012优选为0013取西洋红参1KG，粉碎，加4倍量的90乙醇加热回流提取6次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH9015；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O5030；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。0014本发明20R拟人参皂苷F11在制备抗心律失常药物中的应用。0015当本发明用于制备抗心律失常的药物时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以任何常规形式给药，如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等；当该药物肠胃外给

9、药时，可采取任何常规形式，例如静脉内注射剂、软膏剂、栓剂、和吸入剂等。0016本发明制备抗心律失常的药物是由有效成分单体或有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水、甘油、1，2丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。0017本发明的有益效果在于，为一种新型的抗心律失常

10、药物。实验结果表明20R拟说明书CN101967170A3/7页5人参皂苷F11在抗心律失常方面效果显著。0018有效物质的剂量可以根据服用方式，病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变，口服量为50MG200MG，每日23次服用；注射，10MG30MG，每日一次。附图说明0019图1是本发明化合物的1HNMR谱图；0020图2是本发明化合物的13CNMR谱图；0021图3是本发明化合物的HMQC谱图；0022图4是本发明化合物的化合物的HMBC谱图。具体实施方式0023实施例10024取西洋红参10KG粉碎，加3倍量的95乙醇加热回流提取7次，每次4小时，合并提取液，回收溶剂至干

11、。将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH9030；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O5050；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。0025鉴定0026白色粉末MEOH，易溶于甲醇、乙醇。TLC检测，10H2SO4乙醇溶液显色呈紫色。LIEBERMANNBURCHARD反应呈阳性，MOLISH反应呈阳性。10硫酸水解，PC检出测葡萄糖和鼠李糖，50醋酸部分水解，PC未检测出糖。结合1HNMR及13CNMR谱，确定该化合物为三萜皂苷类化合物。0027采用波谱学方法进行结构鉴定。00281HNMR500MHZ，C5D5N谱，在高场给出9个甲基质子信号，分别为0933H，S

12、、0963H，S、1183H，S、1213H，S、1323H，S、1333H，S、1413H，S、1763H，D，J45HZ、2093H，S，以及其余饱和碳上的质子信号，其中1763H，D，J45HZ为鼠李糖的CH3特征信号。在中场给出1组葡萄糖和1组鼠李糖的质子信号，其中糖的端基质子信号分别为5241H，D，J70HZ和6461H，D，J25HZ，依据其偶合常数和化学位移判断葡萄糖为构型，鼠李糖为构型。002913CNMR1258MHZ，C5D5N谱，共给出42个碳信号。在中场给出1组葡萄糖碳信号和1组鼠李糖碳信号，分别为1018、794、785、726、784、631和1019、724、7

13、22、741、694、187，另外还给出6个连氧碳信号，分别归属为783C3、743C6、707C12、861C20、870C24、701C25。同时在高场给出24个其它饱和碳信号。0030通过解析HMBC谱可知，1分子葡萄糖与1分子鼠李糖是以12连接，与C6位成苷，确定了糖的连接位置及侧链结构。0031进一步解析HMQC谱，对该化合物的所有C、H信号进行了一一归属，结果见表1。0032综上分析，鉴定化合物为20R拟人参皂苷F11，结构为6OL吡喃鼠李糖基12D吡喃葡萄糖基达玛20R，24R环氧3，6，12，25四醇。0033实施例2说明书CN101967170A4/7页60034取西洋红参粉

14、碎，加5倍量的85乙醇加热回流提取5次，每次3小时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH10020；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O6040；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。0035实施例30036取西洋红参粉碎，加6倍量的70乙醇加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH11015；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O7030；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。0037实施例40038取西洋红参1KG，粉碎，加4倍量的90乙醇加热回流提取6次，每次2小

15、时，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经反复硅胶柱色谱，洗脱剂CHCL3MEOH9015；C18反相柱色谱，洗脱剂MEOHH2O5030；乙酸乙酯重结晶，得到20R拟人参皂苷F11。说明书CN101967170A5/7页700390040实验例下面结合药效学实验进一步说明本发明。0041药物说明书CN101967170A6/7页80042试验药品20R拟人参皂苷F11简称20RPF11由吉林圣亚医药科技有限公司提供，批号20080701，试验时用氯化钠注射液配制成所需浓度。0043阴性对照药氯化钠注射液，长春天诚药业有限公司生产，批号20070501。0044阳性对照药利多卡因注射液，20

16、0MG/10ML，山东华鲁制药有限公司生产，批号H37022147。0045动物0046WISTAR大鼠，体重280380G，吉林大学基础医学院实验动物中心提供，动物合格证号SCXK吉20030001。0047方法0048雄性大鼠40只，用随机数字法分为5组，即正常对照组、模型对照组、20RPF11低剂量组、20RPF11高剂量组，每组8只。除正常对照组外，其余32只均静脉注射乌头碱复制心律失常动物模型。大鼠禁食12H，20乌拉坦12G/KGIP麻醉，仰位固定，针型电极插入四肢皮下，记录标准肢导II导联ECG，待心律稳定后，快速尾静脉注射8S内10MG/L的乌头碱60G/KG，持续记录ECG，

17、待典型的频发室性早搏出现后，示造模成功。0049造模成功的大鼠按照分组立即分别尾静脉注射给药，模型对照组，生理盐水1ML/KG；20RPF11低剂量组，20RPF115MG/KG；20RPF11高剂量组，20RPF1115MG/KG；利多卡因组，利多卡因5MG/KG。持续记录ECG，恢复窦律动物数，死亡动物数。0050为评估心律失常的严重程度，将心律失常分为6个等级，以判断20RPF11低、高剂量、利多卡因的治疗效果。心律失常评分法采用CURTISWALKER法结合MEST法，在每段观察时间内取其最严重的1种心律失常相对应的分数作为其心律失常评分。评分标准如下0分，无心律失常；1分，房性心律失

18、常，偶发室早；2分，室早二联律，三联律，频发室早，二度房室传导阻滞；3分，短阵室速，多源室早；4分，室速，三度房室传导阻滞；5分，室颤，死亡。分别于静注药物后1、3、5、7MIN时，对心律失常进行评分。0051计量资料数据用均数标准差XS表示，组间比较，用方差分析及T检验；两组间样本率比较，采用FISHER确切概率法。检验水准005。0052实验结果0053正常对照组在观察期间ECG未见心律失常出现；模型对照组所有造模大鼠在静脉注射乌头碱后于15MIN内ECG显示出现心律失常，静脉注射生理盐水，其中1只于观察60MIN后，仍为室速；另7只迅速发生多种心律失常频发室早、室速、窦性心动过缓、二度、

19、三度房室传导阻滞、交界性逸搏、室性逸搏、室性加速性节律、室扑、室颤、心脏停搏，并相继于310、365、385、530、585、645、690MIN死亡，平均死亡时间为501149MIN；20RPF11低剂量组ECG显示出现心律失常后，静脉注射20RPF115MG/KG，其中2只分别于2190、3860MIN死亡；2只于观察时间60MIN后，仍为室速；另4只分别于1310、1670、2195、2505MIN恢复窦律，平均1920533MIN恢复窦律；20RPF11高剂量组ECG显示出现心律失常后，静脉注射20RPF1115MG/KG，其中1只于1910MIN死亡，1只于观察时间60MIN后，仍为

20、室速；另6只分别于605、845、1102、1195、1925、2205MIN恢复窦律，平均值1313624MIN；利多卡因组ECG显示出现心律失常后，静脉注射利多卡因5MG/KG，其中3只分别于1315、1890、3714MIN死亡；1只于观察时间60MIN后，仍为室速；另4只分别于575、1900、2201、2723MIN恢复窦律，平均1850915MIN恢复说明书CN101967170A7/7页9窦律。0054与正常对照组比较，乌头碱具有明显致心律失常的作用；与模型对照组相比，20RPF115MG/KG，15MG/KG，利多卡因5MG/KG均有对抗乌头碱诱发大鼠心律失常的作用P005或P

21、001。0055与模型对照组比较，20RPF11及利多卡因在3MIN时均显示其明显降低心律失常评分的作用P001或P005。20RPF11高剂量组在5MIN时显示降低心律失常评分的作用优于20RPF11低剂量组、利多卡因组P001。0056制备药剂的实施例1005720R拟人参皂苷F11200G以12丙二醇1000ML溶解，过滤后分装于1000支安瓶中，每1ML，含20R拟人参皂苷F1120MG。0058制备药剂的实施例1005920R拟人参皂苷F112000G，药用淀粉适量，两者充分混合，装胶囊，制成1000粒胶囊，每粒重025G，含20R拟人参皂苷F11200MG。说明书CN101967170A1/4页10图1说明书附图CN101967170A2/4页11图2说明书附图CN101967170A3/4页12图3说明书附图CN101967170A4/4页13图4说明书附图