使用诸如呋咯地辛的PNP抑制剂与烷化剂或抗CD20剂的组合治疗血液学癌症的方法.pdf

1、10申请公布号CN101969947A43申请公布日20110209CN101969947ACN101969947A21申请号200880126808722申请日2008121061/01276220071210USA61K31/4184200601A61K31/4745200601A61K39/395200601A61K45/06200601A61K35/00200601A61P35/0220060171申请人拜奥克里斯特制药公司地址美国阿拉巴马州72发明人S班蒂亚P布雷特菲尔德YS巴布74专利代理机构中国专利代理香港有限公司72001代理人张萍李炳爱54发明名称使用诸如呋咯地辛的PNP抑制

2、剂与烷化剂或抗CD20剂的组合治疗血液学癌症的方法57摘要本申请涉及血液学癌症的治疗方法，该治疗方法可包括例如给予嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂，以及相关组合物和试剂盒。30优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2010081086PCT申请的申请数据PCT/US2008/0862562008121087PCT申请的公布数据WO2009/076455EN2009061851INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书18页附图8页CN101969947A1/2页21治疗对象的血液学癌症的方法，其包括下列步骤A对所述对象给予有效量的嘌呤核

3、苷磷酸化酶PNP抑制剂；以及B对所述患者给予有效量的烷化剂或抗CD20剂。2权利要求1所述的方法，其中所述PNP抑制剂是呋咯地辛。3权利要求1或2所述的方法，其中所述烷化剂选自芥衍生物、亚硝基脲衍生物、铂化合物和咪唑羧酰胺化合物。4权利要求3所述的方法，其中所述烷化剂是芥衍生物。5权利要求4所述的方法，其中所述烷化剂是苯达莫司汀。6权利要求15中任一项所述的方法，其中所述抗CD20剂是利妥昔单抗。7权利要求16中任一项所述的方法，其中同时给予所述PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。8权利要求16中任一项所述的方法，其中按序给予所述PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。9权利要求8所述的方法，其中

4、给予所述PNP抑制剂之前，给予所述烷化剂或抗CD20剂一次或多次。10权利要求19中任一项所述的方法，其中所述血液学癌症选自慢性淋巴细胞白血病和急性成淋巴细胞白血病。11权利要求10所述的方法，其中所述血液学癌症是慢性淋巴细胞白血病。12权利要求10所述的方法，其中所述血液学癌症是急性成淋巴细胞白血病。13权利要求112中任一项所述的方法，其中对所述对象给予有效量的烷化剂。14权利要求112的任一项所述的方法，其中对所述对象给予有效量的抗CD20剂。15权利要求112中任一项所述的方法，其中所述方法包括对所述对象给予有效量的PNP抑制剂、有效量的烷化剂和有效量的抗CD20剂。16权利要求15所

5、述的方法，其中同时给予所述PNP抑制剂，烷化剂或抗CD20剂。17权利要求15所述的方法，其中按序给予所述PNP抑制剂，烷化剂或抗CD20剂。18权利要求17所述的方法，其中给予所述PNP抑制剂之前，给予所述烷化剂和抗CD20剂一次或多次。19治疗对一种或多种化疗剂耐药的对象的血液学癌症的方法，其包括下列步骤A鉴定对一种或多种化疗剂耐药的对象；以及B对所述患者给予PNP抑制剂。20权利要求19所述的方法，其中所述PNP抑制剂是呋咯地辛。21权利要求19或20所述的方法，其中所述对象对一种或多种选自烷化剂和嘌呤核苷类似物的化疗剂耐药。22权利要求21所述的方法，其中所述烷化剂是苯达莫司汀。23权

6、利要求21所述的方法，其中所述嘌呤核苷类似物是氟达拉滨。24权利要求2123中任一项所述的方法，其中所述血液学癌症选自慢性淋巴细胞白血病和急性成淋巴细胞白血病。25权利要求24所述的方法，其中所述血液学癌症是慢性淋巴细胞白血病。26权利要求24所述的方法，其中所述血液学癌症是急性成淋巴细胞白血病。权利要求书CN101969947A2/2页327治疗患有血液学癌症的对象的方法，其包括下列步骤A检测来自所述对象的样本中一种或多种癌细胞中的P53缺失；以及B对所述对象给予PNP抑制剂。28权利要求27所述的方法，其中所述PNP抑制剂是呋咯地辛。29权利要求27或28所述的方法，其进一步包括检测17P

7、缺失的存在。30权利要求2729中任一项所述的方法，其进一步包括确定样本中的一种或多种癌细胞是否对一种或多种化疗剂耐药。31权利要求30所述的方法，其中所述一种或多种癌细胞对一种或多种选自烷化剂和嘌呤核苷类似物的化疗剂耐药。32权利要求2731中任一项所述的方法，其中所述血液学癌症选自慢性淋巴细胞白血病和急成性淋巴细胞白血病。33权利要求32所述的方法，其中所述血液学癌症是慢性淋巴细胞白血病。34权利要求32所述的方法，其中所述血液学癌症是急性成淋巴细胞白血病。35药物组合物，其包含PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。36权利要求35所述的组合物，其中所述PNP抑制剂是呋咯地辛。37权利要求3

8、5所述的组合物，其包含呋咯地辛和苯达莫司汀。38权利要求35所述的组合物，其包含呋咯地辛和利妥昔单抗。39权利要求3538中任一项所述的组合物，其包含PNP抑制剂、烷化剂和抗CD20剂。40权利要求39所述的组合物，其包含呋咯地辛、苯达莫司汀和利妥昔单抗。41试剂盒，其包含PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。42权利要求41所述的试剂盒，其进一步包含所述PNP抑制剂、所述烷化剂、所述抗CD20剂或它们的任何组合的递送体系。43权利要求41或42所述的试剂盒，其进一步包含用于治疗对象的说明书。44权利要求4143中任一项所述的试剂盒，其包含PNP抑制剂和烷化剂。45权利要求4143中任一项所述的

9、试剂盒，其包含PNP抑制剂和抗CD20剂。46权利要求4145中任一项所述的试剂盒，其中所述PNP抑制剂是呋咯地辛。47权利要求4146中任一项所述的试剂盒，其包含呋咯地辛和苯达莫司汀。48权利要求4147中任一项所述的试剂盒，其包含呋咯地辛和利妥昔单抗。49根据权利要求4148的任一项所述的试剂盒，其包括PNP抑制剂、烷化剂和抗CD20剂。50权利要求49所述的试剂盒，其包含呋咯地辛、苯达莫司汀和利妥昔单抗。51试剂盒，其包含PNP抑制剂。52权利要求51所述的试剂盒，进一步包含标签，其指出将内含物给予对烷化剂耐药的对象。53权利要求51或52所述的试剂盒，其进一步包含标签，其指出将内含物给

10、予具有P53缺失的对象。54权利要求5153中任一项所述的试剂盒，其进一步包含标签，其指出将内含物与烷化剂或抗CD20剂一起给药。权利要求书CN101969947A1/18页4使用诸如呋咯地辛的PNP抑制剂与烷化剂或抗CD20剂的组合治疗血液学癌症的方法技术领域0001本申请涉及通过包括给予嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂来治疗血液学癌症例如血癌的方法。尤其描述了治疗慢性淋巴细胞白血病CLL和急性淋巴细胞白血病ALL的方法。0002相关申请0003本申请要求2007年12月10提交的序列号为61/012,762的美国申请的优先权，通过引用将该申请并入本文。背景技术0004癌症目前在美国是第二大死亡

11、原因，在美国有超过8,000,000人已被诊断有癌症。1995年，癌症占美国所有死亡数的233例如参见USDEPTOFHEALTHANDHUMANSERVICES，NATIONALCENTERFORHEALTHSTATISTICS美国卫生及公共服务部，美国国家卫生统计中心，HEALTHUNITEDSTATES199697和INJURYCHARTBOOK1171997。0005目前主要用三种疗法，即手术、放射和化疗之一或其组合来治疗癌症。手术涉及整体去除有病的组织。虽然手术有时有效除去位于一定部位例如乳腺、结肠和皮肤的肿瘤，但不能用于治疗位于其他区域例如脊椎的肿瘤，也不能用于治疗弥散性肿瘤疾病N

12、EOPLASTICCONDITIONS例如白血病。放射疗法涉及将活组织暴露于电离辐射，引起暴露细胞的死亡或损害。放射疗法的副作用可以是急性的和暂时性的，而其它则可能是不可逆的。化疗涉及破坏细胞复制或细胞代谢。化疗最常用于治疗乳腺癌、肺癌和睾丸癌。这种癌症治疗的主要失败原因之一是癌细胞产生耐药性，这是可导致疾病复发或甚至死亡的一个严重问题。因此，需要更有效的癌症治疗。0006概述0007本文提供治疗对象SUBJECT的血液学癌症例如CLL和ALL的方法。该方法包括以下步骤A对该对象给予有效量的嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂；以及B对该对象给予有效量的烷化剂或抗CD20剂。在某些实施方案中，PNP抑

13、制剂是呋咯地辛FORODESINE。在其它实施方案中，所述烷化剂选自芥衍生物MUSTARDDERIVATIVE、亚硝基脲衍生物、铂化合物和咪唑羧酰胺IMIDAZOLECARBOXAMIDE化合物。在一些实施方案中，所述烷化剂是苯达莫司汀。在某些实施方案中，抗CD20剂是利妥昔单抗。0008在一些实施方案中，同时给予PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂，而在其它实施方案中，按序给予PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。在后一实施方案中，给予PNP抑制剂之前，可以给予烷化剂或抗CD20剂一次或多次。0009在另一个实施方案中，治疗对一种或多种化疗剂例如烷化剂，如苯达莫司汀和嘌呤核苷类似物例如氟达拉滨F

14、LURADABINE耐药的对象的血液学癌症的方法可以包括以下步骤A鉴定对一种或多种化疗剂耐药的患者；以及对该对象给予PNP抑制剂。在具体实施方案中，PNP抑制剂是呋咯地辛。说明书CN101969947A2/18页50010在其它实施方案中，治疗患有血液学癌症的对象的方法可以包括以下步骤A检测来自该对象的样本中一种或多种癌细胞中的P53缺失；和B对该对象给予PNP抑制剂。在某些实施方案中，PNP抑制剂是呋咯地辛。在一些实施方案中，该方法可进一步包括检测17P缺失的存在，和/或确定样本中的一种或多种癌细胞是否对一种或多种化疗剂例如烷化剂和嘌呤核苷类似物耐药。0011本文进一步提供药物组合物，其包含

15、PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。0012本文还提供试剂盒，其包含PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。在一些实施方案中，该试剂盒可进一步包含PNP抑制剂、烷化剂、抗CD20剂或它们的任意组合的递送系统。在另一个实施方案中，该试剂盒还可包含治疗对象用的说明书。0013在另一个实施方案中，试剂盒包含PNP抑制剂。在一个实施方案中，试剂盒进一步包含标签，该标签指出将内含物给予对烷化剂耐药RESISTANTTO的对象。在一些实施方案中，该试剂盒也包含标签，该标签指出将内含物给予具有P53缺失的对象。在最后的实施方案中，该试剂盒可以包含标签，该标签指出将内含物与烷化剂或抗CD20剂一起给药。0014某

16、些实施方案提供嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂和烷化剂在制备用于治疗动物的血液学癌症的药物中的用途。0015某些实施方案提供嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂和抗CD20剂在制备用于治疗动物的血液学癌症的药物中的用途。0016某些实施方案提供嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂和烷化剂用于治疗血液学癌症的用途。0017某些实施方案提供嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂和抗CD20剂用于治疗血液学癌症的用途。0018在附图和以下说明中阐述了本发明的一个或多个实施方案的细节。其它特征、目的以及优点将从说明书、附图和权利要求书中变得明显。附图说明0019图1A和1B详细说明了呋咯地辛在表现高和低ZAP70水平的CLL细胞中

17、的细胞毒性效应。0020图2示出了在呋咯地辛治疗之后的细胞内DGTP水平增加与所诱导的细胞死亡量之间的相关性。0021图3示出了详细说明对呋咯地辛具有高度反应的缺失P53P53DELETED的CLL病例的值。0022图4示出了对苯达莫司汀或氟达拉滨治疗具有低敏感性或无敏感性的CLL病例的呋咯地辛治疗数据。0023图5A和5B示出了呋咯地辛/苯达莫司汀和呋咯地辛/氟达拉滨的组合指数COMBINATIONINDEX数据。0024图6详细说明了呋咯地辛/利妥昔单抗的组合指数数据。0025详述0026如本文所描述的，用呋咯地辛治疗诱导原代CLL细胞的依赖于时间和剂量的细胞死亡。使用2M呋咯地辛和20M

18、DGUO，在48的病例中观测到了高于60的细胞说明书CN101969947A3/18页6毒反应，在仅仅9的病例中，细胞毒性低于40。对于基因异常，例如17P13TP53和11Q22Q23ATM缺失、在晚期疾病中获得的且与耐药性和CLL患者的短期存活相关的基因异常而言，没有观察到反应的差别。具有P53或11Q改变的那些CLL病例对呋咯地辛显示高度敏感表示48小时时平均细胞毒性601，在化疗耐药CHEMOREFRACTORYCLL患者中获得良好的细胞毒反应。呋咯地辛与临床抗白血病治疗方案的组合增强体外细细胞毒反应，观察到呋咯地辛和低剂量的苯达莫司汀、单克隆抗体抗CD20利妥昔单抗或环磷酰胺的联合具

19、有强的协同效应。相反，发现与氟达拉滨存在拮抗效应。因此，呋咯地辛代表能够绕过ATM/P53途径而诱导CLL细胞凋亡的新颖化疗方法。0027因此，某些实施方案提供治疗对象的血液学癌症的方法，其包括以下步骤对该对象给予有效量的嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂；以及对该对象给予有效量的烷化剂或抗CD20剂。0028在某些实施方案中，PNP抑制剂是呋咯地辛。0029在某些实施方案中，烷化剂选自芥衍生物、亚硝基脲衍生物、铂化合物和咪唑羧酰胺化合物。0030在某些实施方案中，烷化剂是芥衍生物。0031在某些实施方案中，所述烷化剂是苯达莫司汀。0032在某些实施方案中，抗CD20剂是利妥昔单抗。0033在某些实

20、施方案中，同时给予PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。0034在某些实施方案中，按序给予PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。0035在某些实施方案中，给予PNP抑制剂之前，给予烷化剂或抗CD20剂一次或多次。0036在某些实施方案中，血液学癌症选自慢性淋巴细胞白血病和急性成淋巴细胞白血病。0037在某些实施方案中，血液学癌症是慢性淋巴细胞白血病。0038在某些实施方案中，血液学癌症是急性成淋巴细胞白血病。0039在某些实施方案中，对所述对象给予有效量的烷化剂。0040在某些实施方案中，对所述对象给予有效量的抗CD20剂。0041在该方法的某些实施方案中，该方法包括对所述对象给予有效量的PNP抑

21、制剂、有效量的烷化剂和有效量的抗CD20剂。0042在某些实施方案中，同时给予PNP抑制剂、烷化剂和抗CD20剂。0043在某些实施方案中，按序给予PNP抑制剂、烷化剂和抗CD20剂。0044在某些实施方案中，给予PNP抑制剂之前，给予烷化剂和抗CD20剂一次或多次。0045某些实施方案提供治疗对一种或多种化疗剂耐药的对象的血液学癌症的方法，其包括以下步骤鉴定对一种或多种化疗剂耐药的对象；以及对所述对象给予PNP抑制剂。0046在某些实施方案中，所述对象对选自烷化剂和嘌呤核苷类似物的一种或多种化疗剂耐药。0047在某些实施方案中，烷化剂是苯达莫司汀。0048在某些实施方案中，嘌呤核苷类似物是氟

22、达拉滨FLURADADINE。0049某些实施方案提供治疗患有血液学癌症的对象的方法，包括以下步骤检测来自该对象的样本中一种或多种癌细胞中的P53缺失；以及对所述对象给予PNP抑制剂。说明书CN101969947A4/18页70050在某些实施方案中，该方法可进一步包括检测17P缺失的存在。0051在某些实施方案中，该方法可进一步包括确定样本中的一种或多种癌细胞是否对一种或多种化疗剂耐药。0052在某些实施方案中，所述一种或多种癌细胞对选自烷化剂和嘌呤核苷类似物的一种或多种化疗剂耐药。0053某些实施方案提供药物组合物，其包含PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。0054在某些实施方案中，该组合

23、物包含呋咯地辛和苯达莫司汀。0055在某些实施方案中，该组合物包含呋咯地辛和利妥昔单抗。0056在某些实施方案中，该组合物包含PNP抑制剂、烷化剂和抗CD20剂。0057在某些实施方案中，该组合物包含呋咯地辛、苯达莫司汀和利妥昔单抗。0058某些实施方案提供试剂盒，其包含PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。0059在某些实施方案中，该试剂盒可进一步包含PNP抑制剂、烷化剂、抗CD20剂或它们的任意组合的递送系统。0060在某些实施方案中，该试剂盒可进一步包含治疗对象用的说明书。0061在某些实施方案中，该试剂盒包含PNP抑制剂和烷化剂。0062在某些实施方案中，该试剂盒包含PNP抑制剂和抗CD

24、20剂。0063在某些实施方案中，该试剂盒包含呋咯地辛和苯达莫司汀。0064在某些实施方案中，该试剂盒包含呋咯地辛和利妥昔单抗。0065在某些实施方案中，该试剂盒包含PNP抑制剂、烷化剂和抗CD20剂。0066在某些实施方案中，该试剂盒包含呋咯地辛、苯达莫司汀和利妥昔单抗。0067某些实施方案提供包含PNP抑制剂的试剂盒。0068在某些实施方案中，该试剂盒包含标签，该标签指出将内含物给予对烷化剂耐药的患者。0069在某些实施方案中，该试剂盒进一步包含标签，该标签指出将内含物给予具有P53缺失的对象。0070在某些实施方案中中，该试剂盒进一步包含标签，该标签指出将内含物与烷化剂或抗CD20剂一起

25、给药。0071不像其它核苷类似物，呋咯地辛不并入DNA中。呋咯地辛治疗导致CLL细胞中DGTP增加，并且该增加与细胞的细胞毒性相关，这表明在呋咯地辛治疗之后达到的DGTP水平将是指示细胞毒反应的代用标志SURROGATEMARKER。CLL对呋咯地辛的敏感性可能归因于在该细胞中观察到的高DCK活性由SER74上的DCK磷酸化所正调节的活性。在磷酸DCK/DCK比率与呋咯地辛诱导的凋亡之间观察到显著的正相关。DCK也催化数种抗白血病核苷类似物如氟达拉滨、吉西他滨或克拉屈滨的活化所需的磷酸化。在呋咯地辛与氟达拉滨之间观察到的拮抗效应可以通过联合氟达拉滨与呋咯地辛之后观察到的DGTP水平的下降来解释

26、。这些结果显示，DCK磷酸化和后续的DGTP增加作为CLL细胞中呋咯地辛的凋亡诱导APOPTOSISINDUCTION的第一步而发挥重要作用。0072已经提议数种DGTP介导的细胞死亡的机制。例如，积累的脱氧核苷可以通过脱氧鸟苷激酶和胸苷激酶在线粒体中被磷酸化，导致了可能干涉线粒体DNA合成和修复的DNTP的异常积累，提供对线粒体损害、P53活化和凋亡的增加的敏感性。线粒体DGTP的不平衡说明书CN101969947A5/18页8还可以影响线粒体ATP合成和/或线粒体电子传递链的抗氧化剂酶的失活，导致ROS产生。线粒体基因组对可迅速引发凋亡的氧化应激损害高度敏感。如本文所述，呋咯地辛通过产生R

27、OS和M损失而激活线粒体凋亡途径，导致胱冬酶依赖性和胱冬酶非依赖性的凋亡。通过线粒体电子传递来产生ROS，并且在严重的氧化应激下，O2、OH或H2O2水平的增加引起M的损失和细胞死亡。由呋咯地辛诱导的这些事件通过用TIRON和NACO2的特异性清除剂预孵育CLL细胞来回复REVERTED，这支持了在线粒体凋亡途径的活化之前的氧化应激的作用。P53的磷酸化和活化通过DNA损害反应来诱导，而且通过数个应激信号来诱导。超氧化物超量生产和后续的DNA损害的诱导能够通过活化ROS介导的线粒体途径和P53活化来诱发凋亡。在这种意义上讲，由呋咯地辛诱导的ROS产生可以用作P53活化的上游调节剂。本文描述了证

28、明野生型P53CLL病例中的P53稳定化以及呋咯地辛在具有P53改变的病例中活化线粒体凋亡途径的结果，显示呋咯地辛通过与P53无关的不同的和/或另加的机制起作用。氧化应激和ROS产生还导致转录因子E2F1的活化，其通过不同途径调节依赖于P53的凋亡以及与P53无关的凋亡。E2F1增加也响应DNA损害而发生磷酸化的残基处的P53磷酸化，而且能够通过经由与P53无关的凋亡途径活化P53同源性P73来诱导细胞死亡。对ROS产生如何能够调节E2F1、P53和/或P73活化以及细胞死亡仍然认识甚少。0073线粒体凋亡途径的一个早期事件是形成凋亡体和活化胱冬酶9，其裂解并活化胱冬酶3以及胱冬酶8。呋咯地辛

29、诱导胱冬酶9和胱冬酶3的与时间有关的活化，以及与胱冬酶9活化同时发生的胱冬酶8酶原PROCASPASE8的与时间有关的活化。进而，胱冬酶8诱导BID蛋白裂解为其促凋亡的截短形式，这激活线粒体凋亡途径。胱冬酶8的选择性抑制减少了由呋咯地辛诱导的M损失，但对于晚期阶段细胞死亡的效应被节制，这表明胱冬酶8/BID导致线粒体凋亡途径的放大环路AMPLIFICATIONLOOP。胱冬酶9活化可能本身不足以诱导凋亡，所以胱冬酶8/BID的活化与凋亡XIAP和存活蛋白SURVIVIN的抑制剂的减少一起提高胱冬酶9和胱冬酶3活性，因此加强由呋咯地辛诱导的凋亡。0074蛋白的BCL2家族控制细胞凋亡的执行。在促

30、存活BCL2成员如BCL2和MCL1与促凋亡BCL2成员BAX、BAK和唯BH3域蛋白BIM、PUMA、NOXA、BAD、BID、BMF、BIK和HRK之间的平衡控制许多死亡信号转导途径的输出。在CLL患者中，高水平的BCL2和MCL1与疾病进程、低存活率和无法获得对使用烷化剂、核苷类似物和利妥昔单抗的疗法的完全反应相关。呋咯地辛诱导积累BIM蛋白以及降低MCL1水平，而不改变BCL2水平。在CLL细胞中，BIM与MCL1相关，所以降低MCL1水平将使得CLL细胞对该唯BH3域蛋白敏感。BIM与截短BID均具有作为抗凋亡BCL2成员的抑制剂和促凋亡BAX和BAK的直接活化剂的双重功能。在这种意

31、义上讲，增加BIM水平连同活化BID将导致BAX和BAK活化，并且随着MCL1的降低，剩余的BCL2抗凋亡能力将被倾覆。本文提供的结果表明，呋咯地辛所产生的MCL1降低程度以及BIM增加程度显著地与凋亡诱导相关，且MCL1和BIM基础水平可以确定CLL细胞对呋咯地辛的敏感性。0075已经证明线粒体凋亡途径的活化不依赖于P53状态。已有报道，P73诱导P53的转录靶标能够克服对缺乏功能性P53的CLL细胞的凋亡的抗性。响应于数种化疗药物，P73的促凋亡形式TAP73反式激活数种P53靶基因，所述靶基因以依赖性方式但与P53状说明书CN101969947A6/18页9态无关地控制细胞周期停滞和凋亡

32、。已经发现，呋咯地辛在具有功能性FUNCTIONALP53的CLL细胞中诱导P53以及TAP73，但有趣的是，P73MRNA和蛋白水平在具有P53缺失的CLL细胞中也得到增加。氧化应激和ROS产生导致TAP73以及E2F1的活化，二者均为牵涉到通过依赖于P53的机制和与P53无关的机制活化线粒体凋亡途径的蛋白。因此，由呋咯地辛诱导的ROS的升高可提供活化E2F1和/或上调TAP73的信号。转录因子的FOXO家族调节涉及凋亡的许多基因的表达，并且可通过增加的氧化应激来活化。FOXO1和FOXO3A是E2F1的转录靶标，并且已表明对于ROS诱导的凋亡是必需的，同时是造血细胞中BIM表达的转录因子。

33、另外，在数种凋亡刺激下，ROS清除剂阻断FOXO3A和BIM的诱导。已有描述，FOXO1A和BIM二者的表达以及后续的凋亡通过缺乏P53的肿瘤细胞中的P73来调节。在呋咯地辛治疗后，显示了与P53状态无关的P73和BIM的蛋白和MRNA显著上调，同时FOXO1和FOXO3A水平增加，与在早期阶段检测到的水平相比增加。可以通过任何FOXO成员来控制FOXO调节的靶基因的表达，如由FOXO1A和FOXO3A二者产生的BIM转录调节所示，表明了具有丰富REDUNDANT的作用机理。0076因此，本文所述的结果提供涉及呋咯地辛在CLL细胞中诱导与P53状态无关的细胞死亡的机制的证据，揭示了不同程序性细

34、胞死亡途径可以在相同细胞中共存，并且可以被各种刺激选择性诱导。0077这些结果显示，呋咯地辛作为单一药剂，或者与苯达莫司汀或利妥昔单抗组合，在CLL的治疗中是高度有效的。因此，例如在具有低毒性特性PROFILES的口服和静脉内制剂中可利用的呋咯地辛是对预后差例如17P的患者、具有难治疾病的患者的治疗选择和/或对年长患者的治疗选择。在复发CLL患者中已经启动呋咯地辛的多中心、开放标记I期临床试验。0078A血液学癌症的治疗方法0079本文提供治疗对象的血液学癌症例如血癌的方法。这些类型的癌症的实例包括例如急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞白血病ALL、慢性淋巴细胞白血病CLL

35、、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤和脊髓发育不良综合征、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤恶性淋巴瘤和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症WALDENSTROMSMACROGLOBULINEMIA。在一些实施方案中，血液学癌症是CLL。在其它实施方案中，血液学癌症是ALL。0080对象可以包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物包括例如人；非人灵长目，例如猿和猴；牛；马；绵羊；大鼠；小鼠；猪；和山羊。非哺乳动物包括例如鱼和鸟。0081在一个实施方案中，该方法包括对所述对象给予嘌呤核苷磷酸化酶PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。在某些实施方案中，给予PNP抑制剂和烷化剂。在另一个实施方案中，给予PNP抑制剂和抗CD20剂。

36、在又一个实施方案中，在鉴定对一种或多种化疗剂例如苯达莫司汀或氟达拉滨耐药的对象之后给予PNP抑制剂。在又一个实施方案中，在检测对象中的P53缺失之后给予PNP抑制剂。0082不受理论约束，PNP抑制剂可以诱导血浆2脱氧鸟苷DGUO的升高和细胞内三磷酸脱氧鸟苷DGTP的积累，导致细胞死亡诱导。PNP抑制剂的非限制性例子可以包括转让给BIOCRYSTPHARMACEUTICALS，INC的美国专利NOS4,985,433；4,985,434；5,008,265；5,008,270；5,565,463和5,721,240中所公开的那些抑制剂，这些专利的公开说明书CN101969947A7/18页10

37、内容通过引用并入本文。在某些实施方案中，PNP抑制剂是呋咯地辛或其盐，包括HCL盐00830084不受理论约束，烷化剂是指化学上修饰DNA并破坏其功能的化疗化合物。一些烷化剂引起在双链DNA分子的同一条链或互补链上的核苷酸之间形成交联，而另一些烷化剂引起DNA链之间的碱基对错配。烷化剂可以是芥衍生物、亚硝基脲衍生物、铂化合物或咪唑羧酰胺化合物。烷化剂的实例包括苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、顺铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、达卡巴嗪、六甲基三聚氰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、氮芥、美法仑、米托坦、丝裂霉素、哌泊溴烷、丙卡巴肼、链佐星、塞替派和曲他胺。在一些情况下，烷化剂可以是苯达莫司汀或其盐，包括H

38、CL盐00850086抗CD20剂可以是靶向B细胞表面蛋白CD20例如选择性结合于B细胞表面蛋白CD20的任何药剂。在一些实施方案中，抗CD20剂是CD20的特异性抗体。不受理论约束，据认为，这些药剂可以通过三种机制之一来发挥作用1补体介导的细胞毒性；2抗体依赖性细胞介导的细胞毒性；和3凋亡的诱导。抗CD20剂的实例包括利妥昔单抗、替伊莫单抗、曲妥单抗、吉姆单抗和阿仑单抗。在一些实施方案中，抗CD20剂是利妥昔单抗。0087可以通过任何途径给予PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂，所述途径例如手术中、鞘内、椎间盘内INTRADISKAL、椎间盘外周PERIDISKAL、硬膜外包括根周PERI

39、RADICULAR和经椎间孔TRANSFORAMINAL、椎间盘内、硬膜外EPIDURAL和硬膜外PERIDURAL的任意组合、脊椎旁、静脉内、肌内、SC、口服、鼻内、吸入、透皮和胃肠外。0088PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂可与药学上可接受的载体配制，基于所选择的给药途径和标准制药实践来选择所述药学上可接受的载体。可按照药物制剂领域中的标准实践将PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂配制成剂型。参见ALPHONSOGENNARO编，雷明登氏制药科学REMINGTONSPHARMACEUTICALSCIENCES，第18版1990，MACKPUBLISHINGCO，EASTON，PA。

40、适合的剂型可以包括例如片剂、胶囊、溶液、注射溶液、药片、栓剂或混悬剂。0089对于肠胃外给药，可将PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂与适合的载体或稀释剂混合，所述载体或稀释剂例如为水、油尤其植物油、乙醇、盐溶液、右旋糖葡萄糖水溶液和有关糖溶液、甘油或二醇如丙二醇或聚乙二醇。用于肠胃外给药的溶液优选含说明书CN101969947A8/18页11有PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂的水溶性盐。还可以添加稳定剂、抗氧剂和防腐剂。适合的抗氧剂包括亚硫酸盐、抗坏血酸、柠檬酸及其盐、以及乙二胺四乙酸钠。适合的防腐剂包括苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、和氯丁醇。用于肠胃外给药的可以采取

41、水性或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳液的形式。0090对于口服给药，可将PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂与一种或多种用于制备片剂、胶囊、药丸、散剂、颗粒或其他适合的口服剂型的固体非活性成分组合。例如，可将PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂与至少一种赋形剂如填料、粘结剂、保湿剂、崩解剂、溶解阻滞剂SOLUTIONRETARDERS、吸收促进剂、润湿剂、吸收剂或润滑剂组合。0091PNP抑制剂、烷化剂和/或抗CD20剂的具体剂量当然由个体患者的特定情况来确定，所述情况包括患者的尺寸、体重、年龄和性别；所治疗疾病的性质和阶段；疾病的侵袭性以及化合物的给药途径。化合物例如呋咯地辛、苯达莫司汀

42、和利妥昔单抗的剂量和时间表，可以根据例如FDA批准标签中指示的剂量和时间表来单独或联合给药。0092在一些实施方案中，同时给予PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂，而在其它实施方案中，按序给予PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂。在一个实施方案中，可在给予PNP抑制剂之前给予烷化剂或抗CD20剂一次或多次例如两次、三次、四次、五次、10次或20次。在其他实施方案中，可在给予烷化剂或抗CD20剂之前给予PNP抑制剂一次或多次例如两次、三次、四次、五次、10次或20次。0093在一些实施方案中，对象的血液学癌症的治疗可以包括鉴定对一种或多种化疗剂耐药的对象。癌症治疗中的主要失败原因之一是癌细胞所发展的

43、耐药性。这是可以导致疾病复发或甚至死亡的非常严重的问题。在一个实施方案中，可以通过本领域已知的方式来鉴定对一种或多种化疗剂耐药的对象。该对象可以对任何已知的化疗剂耐药。在某些实施方案中，该对象可以对烷化剂例如苯达莫司汀和/或嘌呤核苷类似物例如氟达拉滨FLURADADINE耐药。0094在鉴定耐化疗的对象之后，可对该对象给予PNP抑制剂。在一些实施方案中，PNP抑制剂是盐酸呋咯地辛。0095在另一个实施方案中，对象的血液学癌症的治疗可以包括检测P53缺失例如17P缺失在来自对象的样本中一个或多个癌细胞中的存在。17P缺失是可鉴定可显示出不同生物学和临床行为的血液学癌症对象的标志物。例如，P53改

44、变可以传送耐药性和较短的存活期。0096在一个实施方案中，可对存在P53缺失的对象给予PNP抑制剂。在选择的实施方案中，PNP抑制剂是盐酸呋咯地辛。0097以上讨论的治疗方法涉及单一疗法和联合疗法两者。在联合疗法方面，本公开内容设想给予两种或更多种化疗剂，尤其PNP抑制剂和烷化剂或PNP抑制剂和抗CD20剂。这些化合物中的一些已经被批准用于治疗一种或多种癌症适应症。其它处于临床前和临床开发的各种阶段。0098在一些实施方案中，给予PNP抑制剂和烷化剂或抗CD20剂可以产生协同效应。该效应可以通过组合指数CI的产生来证实。在某些实施方案中，该指数可作为根据CHOU等人的程序ADVANCEENZR

45、EGUL，22，27551985感染的细胞的百分率的函数来计算。这是针对一系列细胞死亡比例来评价系数相互作用的众所周知的试验。例如，如果使用药说明书CN101969947A9/18页12物A的治疗导致30细胞死亡，且使用药物B的治疗导致50细胞死亡，那么可以预期该两种药物的组合将导致65细胞死亡。因此，如果预测的细胞死亡与对于药物组合所实际测定的细胞死亡的比率低于1，那么观察到协同效应。然而，如果该比率大于1，那么观察到拮抗效应。在一个实施方案中，呋咯地辛和苯达莫司汀的组合显示协同效应，而呋咯地辛和氟达拉滨的组合显示拮抗效应参见实施例5。0099B药物组合物0100本文提供药物组合物，其包含P

46、NP抑制剂和烷化剂或PNP抑制剂和抗CD20剂。在一些实施方案中，PNP抑制剂可包括呋咯地辛BCX1777。在某些实施方案中，烷化剂可包括苯达莫司汀。在其它实施方案中，抗CD20剂是利妥昔单抗。0101本文提供的药物组合物含有可用于治疗血液学癌症的量的PNP抑制剂和烷化剂或PNP抑制剂和抗CD20剂、以及药学上可接受的载体。适合于给予本文提供的化合物的药物载体包括本领域技术人员已知适合于特定给药方式的任何此类载体。0102所述组合物在一个实施方案中可以配制成合适的药物制剂，如用于口服给药的溶液、混悬剂、片剂、可分散片剂、丸剂、胶囊、散剂、缓释制剂或酏剂，或用于肠胃外给药的无菌溶液或混悬剂，以及

47、透皮贴片制剂和干粉吸入剂参见例如ANSELINTRODUCTIONTOPHARMACEUTICALDOSAGEFORMS，第四版1985，126。0103PNP抑制剂和烷化剂或PNP抑制剂和抗CD20剂在药物组合物中的浓度取决于化合物的吸收、钝化和排泄率；化合物的物理化学特性；剂量日程表；给药量以及本领域技术人员已知的其他因素。例如，所递送的量足以治疗如本文所述的慢性淋巴细胞白血病。0104所述药物组合物可以一次给药，或者可以分为按时间间隔给药的许多更小剂量。应理解，治疗的精确剂量和持续时间是所治疗的疾病的函数，并可以使用已知的试验规程PROTOCOL或通过从体内或体外试验数据外推而根据经验来

48、确定。应当注意，浓度和剂量值还可以随所要减缓的病症的严重性而改变。应进一步理解，对于任何特定对象，具体的给药方案应该根据个体需要，以及给予组合物的人员或监督组合物给药的人员的专业判断而随时间调节，并且本文所给出的浓度范围仅仅是示例性的，并无意限制所要求的组合物的范围或实践。0105提供所述药物组合物用于以单位剂型给予人和动物，所述单位剂型例如含有合适量的化合物或其药学上可接受的衍生物的片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒、无菌注射溶液或混悬剂以及口服溶液或混悬剂和油水乳剂。在一个实施方案中以单位剂型或多剂量剂型来配制和给予药物治疗活性化合物及其衍生物。本文所使用的单位剂型是指适用于人和动物对象且如本领

49、域已知的那样单独包装的物理上分立的单位。各单位剂量含有预定量的足以产生所需治疗效应的治疗活性化合物以及所需的药物载体、赋形剂或稀释剂。单位剂型的实例包括安瓿和注射器以及单独包装的片剂或胶囊。单位剂型可以按其分数或倍数给药。多剂量剂型是按分开的单位剂型给药的、包装在单一容器内的多个相同的单位剂型。多剂量剂型的实例包括管形瓶、含片剂或胶囊的瓶、或者品脱瓶或加仑瓶。因此，多剂量剂型是没有以包装分开的多个单位剂量。0106可以液体药物给予的组合物可以通过以下方式制备例如将如上所定义的活性化合物和任选的药物佐剂溶解、分散或其它形式混合于载体如水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、二醇、乙醇等中，从而形成溶液或悬浮液。如果需要，待给予的药物组合物还可含有少说明书CN101969947A10/18页13量的无毒辅助物质如润湿剂、乳化剂、增溶剂、PH缓冲剂等，例如乙酸盐、柠檬酸钠、环糊精衍生物、失水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、油酸三乙醇胺酯和其他此类试剂。0107制备此类剂型的实际方法是已知的，或对于本领域技术人员是显而易见的；例如参见雷明登氏制药科学REMINGTONSPHARMACEUTICALSCIENCES，MACKPUBLISHINGCOMPANY，EASTON，PA，第15版，1975。0108可以制备含有0005至100的PNP抑制剂和烷化