沙棘果皮残渣、其制备方法以及从其中提取黄酮的方法.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710590448.7 (22)申请日 2017.07.18 (71)申请人 青海清华博众生物技术有限公司 地址 810000 青海省西宁市城北区青海生 物科技产业园经三路3号 (72)发明人 米世文 王锦凤 康忠军 何晓磊 李之越 (74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理 事务所(普通合伙) 11371 代理人 赵志远 (51)Int.Cl. A61K 36/185(2006.01) C07D 311/62(2006.01) (54)发明名称 沙棘果皮残渣、 其制备

2、方法以及从其中提取 黄酮的方法 (57)摘要 本发明涉及沙棘黄酮的提取领域， 提出了一 种沙棘果皮残渣及其制备方法， 制备方法包括： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料进行冷冻、 第 一次真空干燥和粉碎后， 得沙棘果皮残渣粉， 将 沙棘果皮残渣粉与石油醚混合后脱脂。 通过将沙 棘果经冷冻、 第一次真空干燥、 粉碎和脱脂的方 式对下脚料进行处理形成的沙棘果皮残渣， 极大 的保持了沙棘黄酮的活性， 便于保存和使用， 将 其作为原料， 提高了沙棘果皮残渣的利用价值， 实现沙棘果皮残渣的经济增值和利用。 此外， 本 发明提供的一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的 方法， 其包括： 以上述沙棘果皮残渣作为原料，

3、依 次进行酶解、 提取、 分离纯化和第三次真空干燥， 为沙棘黄酮的提取提供一条新的来源和途径。 权利要求书1页 说明书8页 CN 107375361 A 2017.11.24 CN 107375361 A 1.一种沙棘果皮残渣的制备方法， 其特征在于， 其包括： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下 脚料进行冷冻、 第一次真空干燥和粉碎后， 得沙棘果皮残渣粉， 将所述沙棘果皮残渣粉与石 油醚混合后脱脂。 2.根据权利要求1所述的沙棘果皮残渣的制备方法， 其特征在于， 冷冻所述下脚料包 括： 将所述下脚料于-22-18条件下进行冷冻， 冷冻时间为2030min。 3.根据权利要求1所述的沙棘果皮残渣的制备

4、方法， 其特征在于， 第一次真空干燥所述 下脚料包括： 将冷却后的所述下脚料于真空度为0.080.1MPa， 干燥温度为04条件下 进行干燥至恒重。 4.根据权利要求1所述的沙棘果皮残渣的制备方法， 其特征在于， 脱脂所述沙棘果皮残 渣粉包括： 将所述沙棘果皮残渣粉按料液比1:31:5与所述石油醚混合， 在5070搅拌 加热12h后， 过2060目绢布， 得到滤液， 将所述滤液于-22-18条件下进行冷冻， 然 后第二次真空干燥， 其中， 第二次真空干燥的参数为真空度为0.080.1MPa， 干燥温度为0 4条件下干燥至恒重。 5.一种沙棘果皮残渣， 其特征在于， 其是由如权利要求14任一项所

5、述的沙棘果皮残 渣的制备方法的制得。 6.一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其特征在于， 其包括： 备取原料： 以权利要求5所述的沙棘果皮残渣作为原料； 酶解： 向所述沙棘果皮残渣中加入生物酶和缓冲液， 并调节pH至4.95.4， 进行酶解反 应， 得悬浊液； 提取： 向所述悬浊液加入无水乙醇溶液至乙醇的终浓度的体积分数为6070， 混匀 后加热至6570并进行微波辅助提取， 得提取液； 分离纯化： 将所述提取液进行树脂吸附洗脱得洗脱液； 以及 第三次真空干燥： 将所述洗脱液旋转蒸发至无醇味， 然后进行第三次真空干燥。 7.根据权利要求6所述的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其特征在于，

6、 酶解所述沙 棘果皮残渣的酶解温度为4045， 酶解时间为3060min。 8.根据权利要求6所述的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其特征在于， 以所述沙棘 果皮残渣的质量计， 所述生物酶的加入量为0.41.0mg/g， 所述生物酶选自纤维素酶和果 胶酶中的至少一种， 优选地， 所述生物酶选自纤维素酶， 更优选地， 所述生物酶选自内切葡 聚糖酶。 9.根据权利要求6所述的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其特征在于， 所述沙棘果 皮残渣与所述缓冲液的加入量的料液比为1:61:8； 优选地， 所述缓冲液选自醋酸醋酸 铵缓冲液、 磷酸盐缓冲液和醋酸-醋酸钠缓冲液中的一种或多种， 更优选地， 所述

7、缓冲液选 自醋酸-醋酸钠缓冲液。 10.根据权利要求6所述的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其特征在于， 微波辅助 提取是在功率为200270W， 处理时间为1520min的条件下进行的。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107375361 A 2 沙棘果皮残渣、 其制备方法以及从其中提取黄酮的方法 技术领域 0001 本发明涉及沙棘黄酮的提取领域， 具体而言， 涉及一种沙棘果皮残渣、 其制备方法 以及从其中提取黄酮的方法。 背景技术 0002 沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)在植物分类学中属于胡颓子科， 沙棘属植 物， 是一种落叶性灌木， 其特性是耐旱

8、、 抗风沙， 可以在盐碱化土地上生存， 因此被广泛用于 水土保持。 沙棘果又明醋柳、 酸刺子、 黑刺， 在我国主要分布于青海、 西藏、 内蒙、 山西等省 区。 沙棘为药食同源植物， 其根、 茎、 叶、 花、 果， 特别是沙棘果实含有丰富的营养物质和生物 活性物质， 可以广泛应用于食品、 医药、 轻工、 航天、 农牧鱼业等国民经济的许多领域。 现代 医学研究表明， 沙棘在降低胆固醇、 治疗胃溃疡、 清除体内自由基、 延缓衰老、 止咳化痰、 活 血散瘀、 缓解心绞痛、 防治冠状动脉粥样硬化性心脏病等方面具有一定的功效。 0003 沙棘果中含有丰富的黄酮类成分。 经分析表明沙棘黄酮的主要成分为槲皮素

9、、 异 鼠李素、 儿茶素、 山奈酚等， 具有降血脂， 增强血管弹性及改善血液循环等功能。 沙棘黄酮， 具有安全、 无毒、 药理作用显著的特点， 在食品、 化妆、 医药等方面有着巨大的应用潜力。 0004 近年来， 国内外学者在沙棘黄酮提取分离上进行了大量的研究工作。 沙棘黄酮提 取包括水提法、 有机溶剂提取法、 超声波提取法等方法， 然而上述方法具备提取时间长、 提 取效率低等缺点。 发明内容 0005 本发明的第一目的在于提供一种沙棘果皮残渣的制备方法， 通过将沙棘果经一系 列处理形成沙棘果皮残渣， 使其能够作为原料， 提高了沙棘果皮残渣的利用价值， 实现沙棘 果皮残渣的经济增值和利用。 0

10、006 本发明的第二目的在于提供一种由上述制备方法制得的沙棘果皮残渣， 其更容易 保存和投入生产， 提高了沙棘果皮残渣的利用价值。 0007 本发明的第三目的在于提供一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 该方法能提 高沙棘果皮残渣的利用价值， 实现沙棘果皮残渣的经济增值和利用， 为沙棘黄酮的提取提 供一条新的来源和途径。 0008 本发明的实施例是这样实现的： 0009 一种沙棘果皮残渣的制备方法， 其包括： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料进行 冷冻、 第一次真空干燥和粉碎后， 得沙棘果皮残渣粉， 将沙棘果皮残渣粉与石油醚混合后脱 脂。 0010 一种沙棘果皮残渣， 其是由上述沙棘果皮残渣的制

11、备方法的制得。 0011 一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其包括： 备取原料： 以上述沙棘果皮残渣 作为原料； 酶解： 向沙棘果皮残渣中加入生物酶和缓冲液， 并调节pH至4.95.4， 进行酶解 反应， 得悬浊液； 提取： 向悬浊液加入无水乙醇溶液至乙醇的终浓度的体积分数为60 说 明 书 1/8 页 3 CN 107375361 A 3 70， 混匀后加热至6570并进行微波辅助提取， 得提取液； 分离纯化： 将提取液进行树 脂吸附洗脱得洗脱液； 以及第三次真空干燥： 将洗脱液旋转蒸发至无醇味， 然后进行第三次 真空干燥。 0012 本发明实施例的有益效果是： 0013 本发明实施例提

12、供的沙棘果皮残渣的制备方法， 通过将沙棘果经速冻后压榨取汁 后的下脚料进行深加工， 依次采用冷冻、 第一次真空干燥、 粉碎和脱脂的方式对下脚料进行 处理， 冷冻能够保持下脚料的成分不被破坏， 将冷冻后的下脚料进行第一次真空干燥， 使下 脚料中已冻结成冰的水分不经过液态而直接升华去掉。 因此冻干后的制品不但可以呈现多 孔性状态而保持原来的形状， 低温干燥还可以防止物料热分解。 同时由于真空下干燥的物 料免除了氧化作用， 因此干燥后的制品， 其物理、 化学和生物性能可基本不变。 随后的粉碎 能够能提高沙棘果皮残渣的比表面积， 进而提升沙棘黄酮的提取率， 最后再进行脱脂， 进一 步降低下脚料内的脂溶

13、性非黄酮类杂质的含量， 进一步提高沙棘黄酮的提取率。 通过该方 法制得的沙棘果皮残渣， 其呈粉末状， 其化学和生物性能基本不变， 极大的保持了的沙棘黄 酮的活性， 同时便于保存和使用， 将其作为原料， 提高了沙棘果皮残渣的利用价值， 实现沙 棘果皮残渣的经济增值和利用。 0014 此外， 本发明实施例提供的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 进一步细化了如 何利用沙棘果皮残渣提取黄酮， 经过酶解+醇提+微波辅助提取的工艺， 将细胞壁降解酶引 入提取工艺的方法， 在缩短提取时间和提高提取效率高方面具有十分重要的实践意义， 同 时沙棘黄酮的提取率显著提升， 同时配以后续的分离纯化， 使得沙棘黄酮的纯

14、度更高， 随之 干燥使得沙棘黄酮更易保存和直接利用， 该方法能提高沙棘果皮残渣的利用价值， 实现沙 棘果皮残渣的经济增值和利用， 为沙棘黄酮的提取提供一条新的来源和途径。 沙棘果皮残 渣为沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料， 从沙棘下脚料中提取黄酮类成分， 不仅开拓了活性 成分的有效来源， 同时提高副产物的经济价值。 具体实施方式 0015 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述， 但是本领域技术人员将会 理解， 下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限制本发明的范围。 实施例中未注明具体 条件者， 按照常规条件或制造商建议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为 可以通过市售

15、购买获得的常规产品。 0016 下面对本发明实施例的沙棘果皮残渣、 其制备方法以及从其中提取黄酮的方法进 行具体说明。 0017 一种沙棘果皮残渣的制备方法， 其包括： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料进行 冷冻、 第一次真空干燥和粉碎后， 得沙棘果皮残渣粉， 将沙棘果皮残渣粉与石油醚混合后脱 脂。 接下来， 将以备取下脚料、 制备沙棘果皮残渣粉以及对沙棘果皮残渣粉脱脂三个步骤对 本实施例提及的沙棘果皮残渣的制备方法进行具体阐述。 0018 S101.备取下脚料 0019 将沙棘果速冻压榨取汁后， 剩余的部分即下脚料， 也即是常说的果皮残渣， 但榨汁 剩余的下脚料无法立即投入使用， 因为其残渣多

16、， 容易腐烂， 不易保存， 同时直接利用下脚 料进行沙棘黄酮的提取， 效率极低， 因此， 本实施例中， 将对下脚料进行进一步的精细处理 说 明 书 2/8 页 4 CN 107375361 A 4 和加工， 使其能够作为沙棘黄酮提取的原料。 0020 需要说明的是， 术语 “速冻” 指的是将沙棘果迅速冷冻使其形成极小的冰晶， 不严 重损伤细胞组织， 从而保存了沙棘果的原汁与香味， 且能保存较长时间。 速冻的时间和温度 可参照现有技术进行。 0021 S102.制备沙棘果皮残渣粉 0022 将沙棘果速冻压榨取汁后得到的下脚料依次进行冷冻、 第一次真空干燥和粉碎 后， 得沙棘果皮残渣粉， 其中，

17、冷冻、 第一次真空干燥以及粉碎可以依照现有技术中对食物 的常规的冷冻参数、 第一次真空干燥参数以及粉碎参数进行选择。 经发明人创造性实验得 到， 将下脚料于-22-18条件下进行冷冻， 冷冻时间为2030min， 冷冻能够保持下脚 料的成分不被破坏。 接着于真空度为0.1MPa， 干燥温度为04条件下进行干燥至恒重， 将 冷冻后的下脚料进行第一次真空干燥， 下脚料在低温条件下被干燥， 避免了高温对下脚料 成分的破坏， 极大的保留了下脚料内的有效成分即沙棘黄酮的活性。 随后进行粉碎， 粉碎至 4080目得到沙棘果皮残渣粉。 粉碎能提高沙棘果皮残渣的比表面积， 进而提升沙棘黄酮 的提取率。 002

18、3 S103.对沙棘果皮残渣粉脱脂 0024 将沙棘果皮残渣粉按料液比1:31:5与石油醚混合， 石油醚作为脱脂剂能够溶解 脂溶性非黄酮类杂质， 1:31:5的料液比有利于石油醚将沙棘果皮残渣粉中的脂溶性非黄 酮类杂质充分溶解， 提高沙棘黄酮的提取率。 接着于5070搅拌加热12h后， 过2060 目绢布， 得到滤液。 在5070的条件下搅拌加热， 进一步提升石油醚溶解脂溶性非黄酮类 杂质的量。 然后将滤液于-22-18条件下进行冷冻， 然后进行第二次真空干燥。 将滤液 冷冻后再进行第二次真空干燥， 换而言之， 先将滤液冻结， 然后抽真空， 使物料中已冻结成 冰的水分不经过液态而直接升华去掉。

19、 因此冻干后的制品不但可以呈现多孔性状态而保持 原来的形状， 使其加水后易恢复原状， 而且低温干燥还可以防止物料热分解。 同时由于真空 下干燥的物料免除了氧化作用， 因此干燥后的制品， 其物理、 化学和生物性能可基本不变。 0025 在本发明的优选实施例中， 第二次真空干燥的参数为真空度为0.1MPa， 干燥温度 为04条件下干燥至恒重。 此处的第二次真空干燥参数与步骤 “S102.制备沙棘果皮残渣 粉” 中的第一次真空干燥参数相同， 采用两次真空干燥， 能够极大程度地保留沙棘果皮残渣 中沙棘黄酮的活性， 有利于后续沙棘黄酮的提取。 0026 沙棘果经过上述三个步骤处理后变为沙棘果皮残渣， 其

20、可作为提取黄酮的原料， 提高沙棘果皮残渣的利用价值， 实现沙棘果皮残渣的经济增值和利用， 为沙棘黄酮的提取 提供一条新的来源和途径。 0027 此外， 本发明实施例还提供了一种由上述沙棘果皮残渣的制备方法的制得的沙棘 果皮残渣， 该沙棘果皮残渣不仅仅可以作为提取沙棘黄酮等活性物质的原料， 同时还可以 作为食品辅料， 沙棘果皮残渣内含有大量的膳食纤维， 对预防心脑血管疾病、 糖尿病等非传 染慢性疾病有一定的功效。 0028 本实施例具体将具体阐述沙棘果皮残渣作为提取沙棘黄酮的原料的应用和具体 提取方法， 对沙棘果皮残渣作为食品辅料， 这里不做具体阐述。 0029 一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方

21、法， 其包括： 0030 S100.备取原料 说 明 书 3/8 页 5 CN 107375361 A 5 0031 以上述提及的沙棘果皮残渣作为原料； 此处所指的沙棘果皮残渣可以是按照上述 制备方式直接制备得到， 也可以是由其他厂家按上述制备方法制备后通过市售购买得到。 0032 S200.酶解 0033 向沙棘果皮残渣中加入生物酶和缓冲液， 并调节pH至4.95.4， 进行酶解反应， 得 悬浊液。 0034 具体地， 以沙棘果皮残渣的质量计， 生物酶的加入量为0.41.0mg/g， 该生物酶可 以选自纤维素酶和果胶酶中的至少一种。 果胶酶能够使细胞间的果胶质降解， 把细胞从组 织内分离。

22、纤维素酶能够降解纤维素， 它不是单体酶， 而是起协同作用的多组分酶系， 是一 种复合酶， 主要由外切葡聚糖酶、 内切葡聚糖酶和葡萄糖苷酶等组成。 本实施例中， 以纤维 素酶和果胶酶中的至少一种作为生物酶加入沙棘果皮残渣中， 有利于提高沙棘果皮残渣的 细胞壁的溶解， 从而使沙棘果皮残渣中的沙棘黄酮更多的溶解出来。 有利于提高沙棘黄酮 的提取率。 0035 当生物酶同时选用纤维素酶和果胶酶时， 纤维素酶和果胶酶的质量比为1:1。 在本 发明的优选实施例中， 生物酶选自纤维素酶和果胶酶中的一者， 且选自纤维素酶， 在本发明 的最优选的实施例中， 选择纤维素酶中的内切葡聚糖酶作为生物酶。 当生物酶选自

23、内切葡 聚糖酶时， 生物酶的加入量优选为0.40.8mg/g。 0036 内切葡聚糖酶主要作用于纤维素的非结晶区， 随机水解 -1,4-糖苷键， 将长链的 纤维素截短， 对纤维素的整体降解起到重要作用。 所以利用基因工程的方法， 通过内切葡聚 糖酶与外切葡聚糖酶或葡聚糖甘酶的复配协同作用， 可以有效地降解结晶纤维素。 0037 缓冲液可以保证酶所需的离子环境和pH值， 强酸强碱都可以使其失去活性， 故需 要加入缓冲液， 使在一定的Ph值中， 保持酶的活性。 本实施例中选用的生物酶适宜的pH均在 酸性范围内， 一般为45。 因此， 本实施例中， 选用的缓冲液的pH也均在酸性范围， 优选地， 缓冲

24、液选自醋酸醋酸铵缓冲液、 磷酸盐缓冲液和醋酸-醋酸钠缓冲液中的一种或多种， 更 优选地， 缓冲液选自醋酸-醋酸钠缓冲液。 0038 本实施例中， 沙棘果皮残渣与缓冲液的加入量的料液比为1:61:8； 优选为1:7。 经发明人创造性实验研究发现1:7的料液比能够最大限度的保持酶的活性， 使酶解反应得 以顺利进行。 0039 酶解的参数包括： 酶解温度为4045， 酶解时间为3060min。 发明人经创造性 劳动选取的上述酶解参数有利于保持生物酶的活性， 同时有利于提升酶解的效率。 0040 S300.提取 0041 向步骤 “S200.酶解” 中得到的悬浊液中加入无水乙醇溶液至乙醇的终浓度的体积

25、 分数为6070， 混匀后加热至6570并进行微波辅助提取， 得提取液。 0042 微波辅助提取是在功率为200270W， 处理时间为1520min的条件下进行的。 0043 本实施例中， 采用 “酶解+醇提+微波辅助提取” 的方式进行提取， 先利用生物酶将 沙棘果皮残渣的细胞壁降解， 有利于提升沙棘果皮残渣的有效成分的溶解率， 然后利用无 水乙醇溶液进行提取， 并辅助微波提取， 相较于单一的醇提或微波辅助提取具有显著提高 沙棘黄酮产出率的效果。 0044 S400.分离纯化 0045 将提取液进行树脂吸附洗脱得洗脱液。 说 明 书 4/8 页 6 CN 107375361 A 6 0046

26、具体地， 先将提取液经滤纸过滤， 然后再加入到X-5型树脂柱， 利用1015倍柱体 积的体积分数为95的乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液。 0047 S500.第三次真空干燥 0048 将洗脱液旋转蒸发至无醇味， 然后进行第三次真空干燥。 0049 具体地， 洗脱液于4550水浴， 80100转/min， 真空度为0.070.09MPa条件下 旋转蒸发至无醇味， 然后于真空度0.080.1MPa， 温度50下进行第三次真空干燥得到产 品， 所得粉末即为沙棘黄酮。 0050 下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明， 但并不限制于本发明的内容。 0051 实施例1 0052 一种沙棘果皮残渣的制备方法

27、， 其包括： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料于-22 进行冷冻； 然后进行第一次真空干燥， 第一次真空干燥的参数为： 真空度为0.08MPa， 干燥 温度为4干燥至恒重， 接着取1000g干燥后的下脚料粉碎至40目得到沙棘果皮残渣粉， 备 用。 然后先沙棘果皮残渣粉中加入5000ml石油醚并混合， 在60搅拌加热1h后， 过20目绢 布， 所得滤液在-20进行冷冻， 然后进行减压第二次真空干燥。 第二次减压真空干燥的参 数为： 真空度： 0.08MPa， 干燥温度4， 干燥至恒重终止。 所得固体即为沙棘果皮残渣。 0053 实施例2 0054 一种沙棘果皮残渣的制备方法， 其包括： 将沙棘果速

28、冻压榨取汁后的下脚料于-20 进行冷冻； 然后进行第一次真空干燥， 第一次真空干燥的参数为： 真空度为0.1MPa， 干燥 温度为2干燥至恒重， 接着取1000g干燥后的下脚料粉碎至80目得到沙棘果皮残渣粉， 备 用。 然后先沙棘果皮残渣粉中加入4000ml石油醚并混合， 在60搅拌加热1h后， 过40目绢 布， 所得滤液在-20进行冷冻， 然后进行第二次真空干燥。 第二次减压真空干燥的参数为： 真空度： 0.1MPa， 干燥温度2， 干燥至恒重终止。 所得固体即为沙棘果皮残渣。 0055 实施例3 0056 一种沙棘果皮残渣的制备方法， 其包括： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料于-18 进行

29、冷冻； 然后进行第一次真空干燥， 第一次真空干燥的参数为： 真空度为0.1MPa， 干燥 温度为0干燥至恒重， 接着取1000g干燥后的下脚料粉碎至60目得到沙棘果皮残渣粉， 备 用。 然后先沙棘果皮残渣粉中加入3000ml石油醚并混合， 在60搅拌加热1h后， 过60目绢 布， 所得滤液在-18进行冷冻， 然后进行第二次真空干燥。 第二次真空干燥的参数为： 真空 度： 0.1MPa， 干燥温度0， 干燥至恒重终止。 所得固体即为沙棘果皮残渣。 0057 实施例46 0058 实施例4提供了一种沙棘果皮残渣， 其是由实施例1提供的沙棘果皮残渣的制备方 法制备而得； 实施例5提供了一种沙棘果皮残

30、渣， 其是由实施例2提供的沙棘果皮残渣的制 备方法制备而得； 实施例6提供了一种沙棘果皮残渣， 其是由实施例3提供的沙棘果皮残渣 的制备方法制备而得。 0059 实施例7 0060 一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其包括： 以实施例4提供的沙棘果皮残渣 作为原料， 向1000g沙棘果皮残渣中加入0.7g纤维素酶， 加入醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH至 5.0， 酶解温度为42， 酶解时间为40min， 进行酶解反应， 得到悬浊液； 向悬浊液中加入 2300mL无水乙醇溶液使得乙醇的终浓度为60(体积分数)， 混合均匀后加热至65并进行 说 明 书 5/8 页 7 CN 107375361 A

31、 7 微波辅助提取， 得到提取液。 微波辅助提取的条件为： 功率270W， 处理时间为： 18min； 将提取 液过滤， 滤液过X-5型树脂柱， 利用1000mL的95(体积分数)的乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液； 将洗脱液于45水浴， 100转/min， 真空度为0.07MPa条件下旋转蒸发至无醇味， 然后于真空 度0.08MPa， 温度50下进行第三次真空干燥得到沙棘果皮残渣的总黄酮8.90g， 总黄酮中 花青素的含量为50.2。 0061 实施例8 0062 一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其包括： 以实施例5提供的沙棘果皮残渣 作为原料， 向1000g沙棘果皮残渣中加入0.4g内切葡

32、聚糖酶， 加入醋酸-醋酸钠缓冲液调节 pH至5.4， 酶解温度为45， 酶解时间为30min， 进行酶解反应， 得到悬浊液； 向悬浊液中加入 2350mL无水乙醇溶液使得乙醇的终浓度为70(体积分数)， 混合均匀后加热至70并进行 微波辅助提取， 得到提取液。 微波辅助提取的条件为： 功率250W， 处理时间为： 15min； 将提取 液过滤， 滤液过X-5型树脂柱， 利用1000mL的95(体积分数)的乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液； 将洗脱液于48水浴， 100转/min， 真空度为0.08MPa条件下旋转蒸发至无醇味， 然后于真空 度0.1MPa， 温度50下进行第三次真空干燥得到沙棘果皮残

33、渣中的总黄酮9.10g， 总黄酮中 花青素含量为50.5。 0063 实施例9 0064 一种从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 其包括： 以实施例5提供的沙棘果皮残渣 作为原料， 向1000g沙棘果皮残渣中加入1.0g内切葡聚糖酶， 加入醋酸-醋酸钠缓冲液调节 pH至5.4， 酶解温度为40， 酶解时间为60min， 进行酶解反应， 得到悬浊液； 向悬浊液中加入 2350mL无水乙醇溶液， 此时， 乙醇的终浓度的体积分数为70混合均匀后进行微波辅助提 取， 得到提取液。 微波辅助提取的条件为： 功率200W， 处理时间为： 20min； 将提取液过滤， 滤 液过X-5型树脂柱， 利用1000m

34、L的95(体积分数)的乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液； 将洗脱液 于50水浴， 100转/min， 真空度为0.09MPa条件下旋转蒸发至无醇味， 然后于真空度 0.1MPa， 温度50下进行第三次真空干燥得到沙棘果皮残渣中的总黄酮9.15g， 总黄酮的花 青素含量为51.5。 0065 实施例10 0066 本实施例与实施例9提供的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法基本相同， 区别点 在于： 实施例9中， 生物酶选用内切葡聚糖酶； 缓冲液选自醋酸-醋酸钠缓冲液。 而本实施例 中， 生物酶选用质量比为1:1的纤维素酶和果胶酶， 缓冲液选自醋酸醋酸铵缓冲液、 磷酸 盐缓冲液和醋酸-醋酸钠缓冲液。 006

35、7 实施例11 0068 本实施例与实施例9提供的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法基本相同， 区别点 在于： 实施例9中， 生物酶选用内切葡聚糖酶； 缓冲液选自醋酸-醋酸钠缓冲液。 而本实施例 中， 生物酶选用果胶酶， 缓冲液选自醋酸醋酸铵缓冲液和磷酸盐缓冲液。 0069 对比例 0070 第一、 对下脚料以不同处理方式处理获得沙棘果皮残渣的选择 0071 采用六种不同的处理方式处理沙棘果皮残渣， 然后以不同处理方式获得的沙棘果 皮残渣分别作为原料， 并以实施例7提供的提取方式进行提取， 最后计算不同处理方式获得 的沙棘果皮残渣以相同方式提取后黄酮的提取得率和花青素的含量。 说 明 书 6/8

36、页 8 CN 107375361 A 8 0072 其中， 六种不同的处理方式分别如下： 0073 对比例1： 将沙棘果于常温下榨汁后的下脚料直接作为原料； 0074 对比例2： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料直接作为原料； 0075 对比例3： 将沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料经烘干后作为原料； 0076 对比例4： 将沙棘果速冻榨取汁后的下脚料经真空干燥后作为原料； 0077 对比例5： 将沙棘果速冻榨取汁后的下脚料经冷冻、 真空干燥后作为原料； 0078 试验例1： 将沙棘果速冻榨取汁后的下脚料经冷冻、 真空干燥、 粉碎和脱脂后， 作为 原料。 0079 以上述六种不同的处理方式处理后的得

37、到的沙棘果皮残渣作为原料以相同的方 法进行提取， 获得的黄酮提取产率和花青素提取率的结果请参阅表1。 0080 表1.不同处理方式得到的沙棘果皮残渣对产率的影响 0081 0082 0083 结论： 从对比例1和对比例2可以看出， 速冻榨取果汁后下脚料相较于常温榨取果 汁后的下脚料的保留了有效成分黄酮的活性， 有利于提高黄酮的提取产率和花青素和提取 产率。 由对比例3和对比例4可以看出， 高温烘干的形式进行干燥极大的破坏了下脚料中的 有效成分黄酮的活性， 而真空干燥使下脚料在低温条件下被干燥， 避免了高温对下脚料成 分的破坏， 导致对比例3和对比例4的黄酮提取产率和花青素的提取产率有显著的差别

38、。 此 外， 由对比例5和试验例1可以看出， 粉碎能够提高沙棘果皮残渣的比表面积， 从而提升黄酮 和花青素的提取产率。 0084 第二、 不同提取方式的选择 0085 沙棘多糖的提取方式有多种， 例如： 醇提、 超声波提取、 微波提取， 以及本实施例中 提供的 “酶解+醇提+微波辅助提取” ， 在该对比实验中， 选用实施例2提供的沙棘果皮残渣的 制备方法制得的沙棘果皮残渣作为原料， 分别按照上述四种提取方法进行提取， 该原料中 沙棘多糖的含量为11.5mg/g， 根据以下公式计算沙棘黄酮的提取率： 0086 提取率提取量/沙棘果皮残渣内的沙棘黄酮含量。 0087 需说明的是， 在下述提取工艺中

39、， 未提及的部分， 可参照现有技术。 0088 乙醇提取： 将沙棘果皮残渣加入乙醇进行提取， 摇床水浴浸提2h， 对提取后的滤液 经冷冻干燥得到沙棘黄酮。 0089 超声波提取： 将沙棘果皮残渣， 加入乙醇搅拌均匀后， 置于超声波中提取6min， 摇 床水浴浸提2h， 对提取后的滤液经冷冻干燥得到沙棘黄酮。 0090 微波提取： 将沙棘果皮残渣加入乙醇搅拌均匀后， 置于微波中提取6min， 摇床水浴 浸提2h， 对提取后的滤液经冷冻干燥得到沙棘黄酮。 0091 酶解+醇提+微波辅助提取： 分别以实施例7实施例9提供的方式进行提取。 说 明 书 7/8 页 9 CN 107375361 A 9

40、0092 实验结果参照下表2： 0093 表2.不同提取方式的黄酮提取率的影响 0094 提取方法原料用量(g)黄酮提取量(mg)黄酮提取率() 乙醇提取10005.1845.0 超声波提取10004.1536.1 微波提取10005.3646.6 实施例710008.9077.4 实施例810009.1079.1 实施例910009.1579.6 0095 根据对比例可知， 采用本发明实施例提供的海藻多酚的提取工艺， 可明显提高沙 棘黄酮的提取率。 0096 综上所述， 本发明实施例提供的沙棘果皮残渣的制备方法， 通过将沙棘果经速冻 后压榨取汁后的下脚料进行深加工， 依次采用冷冻、 第一次真

41、空干燥、 粉碎和脱脂的方式对 下脚料进行处理， 冷冻能够保持下脚料的成分不被破坏， 将冷冻后的下脚料进行第一次真 空干燥， 使下脚料中已冻结成冰的水分不经过液态而直接升华去掉。 因此冻干后的制品不 但可以呈现多孔性状态而保持原来的形状， 低温干燥还可以防止物料热分解。 同时由于真 空下干燥的物料免除了氧化作用， 因此干燥后的制品， 其物理、 化学和生物性能可基本不 变。 随后的粉碎能够能提高沙棘果皮残渣的比表面积， 进而提升沙棘黄酮的提取率， 最后再 进行脱脂， 进一步降低下脚料内的脂溶性非黄酮类杂质的含量， 进一步提高沙棘黄酮的提 取率。 通过该方法制得的沙棘果皮残渣， 其呈粉末状， 其化学

42、和生物性能基本不变， 极大的 保持了的沙棘黄酮的活性， 同时便于保存和使用， 将其作为原料， 提高了沙棘果皮残渣的利 用价值， 实现沙棘果皮残渣的经济增值和利用。 0097 此外， 本发明实施例提供的从沙棘果皮残渣中提取黄酮的方法， 进一步细化了如 何利用沙棘果皮残渣提取黄酮， 经过酶解+醇提+微波辅助提取的工艺， 将细胞壁降解酶引 入提取工艺的方法， 在缩短提取时间和提高提取效率高方面具有十分重要的实践意义， 同 时沙棘黄酮的提取率显著提升， 同时配以后续的分离纯化， 使得沙棘黄酮的纯度更高， 随之 干燥使得沙棘黄酮更易保存和直接利用， 该方法能提高沙棘果皮残渣的利用价值， 实现沙 棘果皮残渣的经济增值和利用， 为沙棘黄酮的提取提供一条新的来源和途径。 沙棘果皮残 渣为沙棘果速冻压榨取汁后的下脚料， 从沙棘下脚料中提取黄酮类成分， 不仅开拓了活性 成分的有效来源， 同时提高副产物的经济价值。 0098 以上所描述的实施例是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。 本发明的实 施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围， 而是仅仅表示本发明的选定实施 例。 基于本发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的 所有其他实施例， 都属于本发明保护的范围。 说 明 书 8/8 页 10 CN 107375361 A 10