一种薰倒牛总黄酮提取物、其提取方法及用途.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410784547.5 (22)申请日 2014.12.16 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104523777 A (43)申请公布日 2015.04.22 (73)专利权人 光明乳业股份有限公司 地址 201103 上海市闵行区吴中路578号 (72)发明人 王渊龙 任婧 郭本恒 刘振民 (74)专利代理机构 上海弼兴律师事务所 31283 代理人 朱水平 余化鹏 (51)Int.Cl. A61K 36/185(2006.01) A61P 31/04(2

2、006.01) (56)对比文件 WO 2013009843 A1,2013.01.17, CN 1295853 A,2001.05.23, 吴海峰等.藏药薰倒牛的化学成分研究. 中 国中药杂志 .2007,第32卷(第20期), 张本印等.青海不同地区薰倒牛总黄酮含量 的测定. 分析试验室 .2009,第28卷 张本印等.青海不同地区薰倒牛总黄酮含量 的测定. 分析试验室 .2009,第28卷 审查员 张娜 (54)发明名称 一种薰倒牛总黄酮提取物、 其提取方法及用 途 (57)摘要 本发明公开了一种薰倒牛总黄酮提取物、 其 提取方法及用途。 该提取方法包括下列步骤： 将 薰倒牛原料粉末与溶

3、剂混合， 索氏提取后固液分 离， 得滤液A； 将所述的滤液A浓缩至干， 即得薰倒 牛总黄酮提取物； 其中， 索氏提取的时间为2 24h； 溶剂为有机溶剂或者有机溶剂与水的混合 溶剂； 有机溶剂与水的混合溶剂中， 有机溶剂的 体积百分比在40以上； 有机溶剂为醇类溶剂、 氯代烃类溶剂、 酯类溶剂和烷烃类溶剂中的一种 或多种； 溶剂与薰倒牛原料粉末的体积质量比为 1mL/g60mL/g。 本发明的提取方法的提取率高， 总黄酮提取物的抗菌能力好， 同时该提取方法操 作简单， 设备通用性好， 提取溶剂可以回收利用， 生产成本低， 更适用于工业化生产。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 104

4、523777 B 2018.07.31 CN 104523777 B 1.一种薰倒牛总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于， 其包括下列步骤： 将薰倒牛原料 粉末与溶剂混合， 索氏提取后固液分离， 得滤液A； 将所述的滤液A浓缩至干， 即得薰倒牛总 黄酮提取物； 其中， 所述的索氏提取的时间为2h24h； 所述的溶剂为有机溶剂与水的混合 溶剂； 所述的有机溶剂与水的混合溶剂中， 有机溶剂的体积百分比为6575； 所述的有 机溶剂与水的混合溶剂为乙醇水溶液； 所述的溶剂与薰倒牛原料粉末的体积质量比为1mL/ g60mL/g。 2.如权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 所述的索氏提取的时间为2

5、h8h； 和/ 或， 所述的索氏提取的温度为40100。 3.如权利要求2所述的提取方法， 其特征在于， 所述的索氏提取的时间为2h6h； 和/ 或， 所述的索氏提取的温度为7080。 4.如权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 所述的溶剂与薰倒牛原料粉末的体积质 量比为10mL/g40mL/g。 5.如权利要求4所述的提取方法， 其特征在于， 所述的溶剂与薰倒牛原料粉末的体积质 量比为20mL/g40mL/g。 6.如权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 所述的薰倒牛原料粉末中的薰倒牛原料 为薰倒牛的根、 茎、 叶、 花和果实中的一种或多种。 7.如权利要求6所述的提取方法， 其特征

6、在于， 所述的薰倒牛原料粉末中的薰倒牛原料 为薰倒牛茎。 8.如权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 所述的薰倒牛原料粉末在使用前进行干 燥处理； 所述的干燥的方法为真空干燥； 其中， 所述的真空干燥的温度为2065； 所述 的真空干燥的真空度为20kPa65kPa。 9.如权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 所述的薰倒牛原料粉末的颗粒粒径为24 150目； 和/或， 所述的薰倒牛原料粉末的制备方法为采用中药粉碎机将薰倒牛原料进行粉碎， 过24150目筛， 即可。 10.如权利要求9所述的提取方法， 其特征在于， 所述的薰倒牛原料粉末的颗粒粒径为 50120目； 和/或， 所述的薰倒

7、牛原料粉末的制备方法为采用中药粉碎机将薰倒牛原料进行粉碎， 过50120目筛， 即可。 11.如权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 所述的固液分离中使用的过滤膜的孔 径为0.2210 m； 所述的滤液A浓缩至干中所述的浓缩的方法为减压蒸馏； 所述的减压蒸馏的温度为30 80； 所述的减压蒸馏的真空度为050kPa； 和/或， 所述的滤液A浓缩至干后的回收液， 还进一步回收套用至下批提取工艺中。 12.如权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 所述的薰倒牛总黄酮提取物的提取方 法还进一步包含精制的操作； 所述的精制的方法包括下列步骤： 将所述的薰倒牛总黄酮提 取物， 用有机溶剂或水萃取后

8、， 得有机相， 将有机相浓缩至干， 即得薰倒牛总黄酮提取物产 品； 其中， 所述的有机溶剂为氯代烃类溶剂、 酯类溶剂和烷烃类溶剂中的一种或多种。 13.如权利要求12所述的提取方法， 其特征在于， 所述的将有机相浓缩至干中所述的浓 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 104523777 B 2 缩的方法为减压蒸馏； 所述的减压蒸馏的温度为3070； 所述的减压蒸馏的真空度为 20kPa60kPa。 14.一种由权利要求113任一项所述的提取方法得到的薰倒牛总黄酮提取物。 15.一种如权利要求14所述的薰倒牛总黄酮提取物在制备抗菌药物中的应用； 所述的 抗菌药物为抗革兰氏阴性菌药物； 所述

9、的革兰氏阴性菌为大肠杆菌。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 104523777 B 3 一种薰倒牛总黄酮提取物、 其提取方法及用途 技术领域 0001 本发明涉及一种薰倒牛总黄酮提取物、 其提取方法及用途。 背景技术 0002 黄酮类物质广泛存在于植物界， 它可分为黄酮类、 异黄酮类、 黄酮醇类、 查尔酮类 等多种类型。 不同类型的黄酮溶解的溶剂也有不同。 例如黄芩， 从中分离出来的黄酮类化合 物有黄芩苷(含4.0-5.2)、 黄芩素、 汉黄芩苷、 汉黄芩素。 其中黄芩苷是主要有效成分， 具有抗菌、 消炎作用； 此外， 其还具有降转氨酶的作用。 黄芩苷的苷元是黄芩素， 黄芩素的磷 酸

10、酯钠盐可用于治疗过敏、 喘息等疾病。 黄芩苷几乎不溶于水， 难溶于甲醇、 乙醇和丙酮等 溶剂， 可溶于热乙酸。 因此， 在现有技术中， 黄芩苷可用水煎煮加酸沉淀的办法提取。 又例如 葛根， 其含有的黄酮类成分主要为大豆异黄酮， 在分离葛根总黄酮时用氧化铝柱色谱法分 离方法。 0003 薰倒牛(Biebersteinia heterostem on Maxim)为1年生草本植物， 具有浓烈的腥 臭味， 民间又称臭花椒、 狼尾巴， 是蔷薇纲牻牛儿苗亚纲薰倒牛科(Biebersteiniaceae)薰 倒牛属的植物。 0004 薰倒牛主要分布在西藏， 青海， 甘肃、 四川、 新疆等地区， 于海拔10

11、003200米的草 原和河滩可见。 薰倒牛具有很高的药用价值， 其味辛、 苦， 性寒， 具有消炎止痛， 清热解毒， 清 血热， 祛风毒的作用， 具有广泛的药理活性。藏药薰倒牛的活性物质研究 (药学学报， 1995 年； 30(3)： 211-214)中已经有报道了薰倒牛中含有相当的黄酮类成分。 黄酮类化合物具有 抗病毒、 抗肿瘤、 强心、 降压、 扩张冠状动脉降低胆固醇、 利尿、 止咳祛痰、 保肝等作用。 通过 检索国内外相关资料， 至今尚未发现以乙醇为萃取液， 用索氏提取法对薰倒牛的总黄酮进 行提取的工艺， 以及其在制备抑菌药物中应用的相关研究与报道。 发明内容 0005 本发明所要解决的技

12、术问题是为了填补现有技术中没有薰倒牛总黄酮提取工艺 的空白， 而提供一种薰倒牛总黄酮提取物、 其提取方法及用途。 本发明薰倒牛总黄酮的提取 方法的提取率高， 提取出的总黄酮提取物抗菌能力好， 同时该提取方法操作简单， 设备通用 性好， 提取溶剂可以回收利用， 生产成本低， 更适用于工业化生产。 0006 本发明主要通过以下技术方案解决上述技术问题的。 0007 本发明提供了一种薰倒牛总黄酮提取物的提取方法， 其包括下列步骤： 将薰倒牛 原料粉末与溶剂混合， 索氏提取后固液分离， 得滤液A； 将所述的滤液A浓缩至干， 即得薰倒 牛总黄酮提取物； 其中， 所述的索氏提取的时间为2h24h； 所述的

13、溶剂为有机溶剂或者有 机溶剂与水的混合溶剂； 所述的有机溶剂与水的混合溶剂中， 有机溶剂的体积百分比在 40以上； 所述的有机溶剂为醇类溶剂、 氯代烃类溶剂、 酯类溶剂和烷烃类溶剂中的一种或 多种； 所述的溶剂与薰倒牛原料粉末的体积质量比为1mL/g60mL/g。 0008 所述的索氏提取的时间较佳地为2h8h； 更佳地为2h6h。 所述的索氏提取的温 说 明 书 1/6 页 4 CN 104523777 B 4 度一般为溶剂回流温度， 较佳地为40100； 更佳地为7080。 0009 所述的有机溶剂较佳地为醇类溶剂和/或酯类溶剂中的一种或多种。 所述的醇类 溶剂较佳地为甲醇和/或乙醇。 所

14、述的氯代烃类溶剂较佳地为二氯甲烷和/或三氯甲烷。 所 述的酯类溶剂较佳地为乙酸乙酯。 所述的烷烃类溶剂较佳地为石油醚和/或正己烷。 所述的 有机溶剂与水的混合溶剂中， 有机溶剂的体积百分比较佳地为6575。 所述的有机溶 剂与水的混合溶剂较佳地为乙醇水溶液。 所述的溶剂与薰倒牛原料粉末的体积质量比较佳 地为10mL/g40mL/g； 更佳地为20mL/g40mL/g。 0010 所述的薰倒牛原料粉末中的薰倒牛原料可为薰倒牛的根、 茎、 叶、 花和果实中的一 种或多种， 较佳地为薰倒牛茎。 本发明中， 所述的薰倒牛茎为自行采集， 采集地点为甘肃省 天祝藏族自治县， 采集时间为每年8月下旬； 也可

15、在甘肃省天祝藏族自治县购买得到(市售 可得)。 0011 所述的薰倒牛原料粉末在使用前， 可按照本领域常规的方法进行干燥处理。 所述 的干燥的方法可为本领域可为本领域中药材粉末干燥常规的方法， 较佳地为真空干燥。 所 述的真空干燥的方法较佳地为采用本领域常规的真空干燥设备进行干燥。 其中， 所述的真 空干燥的温度较佳地为2065。 所述的真空干燥的真空度较佳地为20kPa65kPa。 0012 所述的薰倒牛原料粉末的颗粒粒径可为本领域中药材粉末常规的颗粒粒径， 较佳 地为24150目， 更佳地为50120目。 0013 所述的薰倒牛原料粉末的制备方法可为本领域中药材粉末常规的制备方法， 较佳

16、地为采用本领域常规的中药粉碎机将薰倒牛原料进行粉碎， 过24150目筛， 较佳地过50 120目筛， 即可。 所述的薰倒牛原料在粉碎前， 较佳地经洗净， 自然条件下干燥后再使用。 0014 所述的固液分离的方法可为本领域固液分离常规的方法， 只要能够使滤液A与薰 倒牛残渣分开即可； 所述的固液分离中使用的过滤膜的孔径较佳地为0.2210 m。 0015 所述的滤液A浓缩至干中所述的浓缩的方法可为本领域滤液浓缩常规的方法， 较 佳地为减压蒸馏。 所述的减压蒸馏的温度较佳地为3080。 所述的减压蒸馏的真空度 较佳地为050kPa。 0016 所述的滤液A浓缩至干后的回收液， 还可以回收套用至下批

17、提取工艺中。 0017 所述的薰倒牛总黄酮提取物的提取方法还可进一步包含精制的操作。 所述的精制 的方法可为本领域常规的精制方法， 较佳地包括下列步骤： 将所述的薰倒牛总黄酮提取物， 用有机溶剂或水萃取后， 得有机相， 将有机相浓缩至干， 即得薰倒牛总黄酮提取物产品。 其 中， 所述的有机溶剂为氯代烃类溶剂、 酯类溶剂和烷烃类溶剂中的一种或多种。 所述的将有 机相浓缩至干中所述的浓缩的方法可为本领域常规的方法， 较佳地为减压蒸馏。 所述的减 压蒸馏的温度较佳地为3070。 所述的减压蒸馏的真空度较佳地为20kPa60kPa。 0018 本发明还提供了一种由上述提取方法得到的薰倒牛总黄酮提取物。

18、 0019 本发明还提供了所述的薰倒牛总黄酮提取物在制备抗菌药物中的应用。 0020 所述的抗菌药物较佳地为抗革兰氏阳性菌药物。 所述的革兰氏阳性菌较佳地为大 肠杆菌。 0021 在不违背本领域常识的基础上， 上述各优选条件， 可任意组合， 即得本发明各较佳 实例。 0022 本发明所用试剂和原料均市售可得。 说 明 书 2/6 页 5 CN 104523777 B 5 0023 本发明的积极进步效果在于： 0024 本发明薰倒牛总黄酮的提取方法的提取率高， 操作简单， 设备通用性好， 提取溶剂 可以回收利用， 生产成本低， 适用于工业化生产。 提取得到的薰倒牛总黄酮提取物能有效的 抑制大肠杆

19、菌等革兰氏阳性菌生长， 可替代抗生素， 在药物领域有着良好的应用前景。 附图说明 0025 图1为本发明实施例1薰倒牛总黄酮提取物抗大肠杆菌的敏感试验结果图。 具体实施方式 0026 下面通过实施例的方式进一步说明本发明， 但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 按照常规方法和条件， 或按照商 品说明书选择。 0027 下述实施例14中， 薰倒牛茎为自行采集， 采集地点为甘肃省天祝藏族自治县， 采 集时间为每年8月下旬。 薰倒牛茎的一般处理过程为： 选取薰倒牛茎， 洗净薰倒牛茎上泥土， 自然条件下干燥。 0028 下述实施例5中， 薰倒牛茎为在

20、甘肃省天祝藏族自治县购买得到。 0029 下述实施例中提取率总黄酮的质量/原料的质量。 0030 实施例1 0031 (1)粉碎干燥： 将薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎， 过100目筛， 采用真空干燥器在 25， 真空度50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎原料粉末。 0032 (2)索氏提取： 取15克干燥的薰倒牛茎原料粉末于折好的滤纸套中， 放入连接好的 索氏提取器中， 加入体积百分比为75的乙醇水溶液300mL， 80提取2小时， 得提取混合 液。 0033 (3)固液分离： 提取完成后， 用滤纸过滤步骤(2)中的提取混合液， 滤纸下层得到滤 液A， 滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。 0034

21、(4)滤液A浓缩至干： 采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa， 温度80的条件下， 浓缩 滤液A至干， 并回收体积百分比为75的乙醇水溶液， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物。 0035 (5)精制： 采用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮提取物， 得到乙酸乙酯相。 然后采用 旋转蒸发仪在真空度为40kPa， 温度30的条件下， 浓缩乙酸乙酯相至干， 并回收乙酸乙酯， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物产品。 提取率为2.7。 0036 实施例2 0037 (1)粉碎干燥： 将洗净的薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎， 过50目筛， 采用真空干 燥器在25， 真空度50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎原料粉末。 0038 (

22、2)索氏提取： 取15克干燥的薰倒牛茎原料粉末于折好的滤纸套中， 放入连接好的 索氏提取器中， 加入乙酸乙酯300mL， 75提取4小时， 得提取混合液。 0039 (3)固液分离： 提取完成后， 用滤纸过滤步骤(2)中的提取混合液， 滤纸下层得到滤 液A， 滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。 0040 (4)滤液A浓缩至干： 采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa， 温度40的条件下， 滤液A 浓缩至干， 并回收乙酸乙酯， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物。 提取率为1.8。 说 明 书 3/6 页 6 CN 104523777 B 6 0041 实施例3 0042 (1)粉碎干燥： 将薰倒牛茎放入中药粉碎机内

23、粉碎， 过150目筛， 采用真空干燥器在 25， 真空度65kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎原料粉末。 0043 (2)索氏提取： 索氏提取条件为： 取15克干燥的薰倒牛茎原料粉末于折好的滤纸套 中， 放入连接好的索氏提取器中， 加入正己烷300mL， 70提取8小时， 得提取混合液。 0044 (3)固液分离： 提取完成后， 用滤纸过滤步骤(2)中的提取混合液混合液， 滤纸下层 得到滤液A， 滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。 0045 (4)滤液A浓缩至干： 采用旋转蒸发仪在真空度为5kPa， 温度70的条件下， 浓缩滤 液A至干， 并回收正己烷溶剂， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物。 0046 (5

24、)精制： 采用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮提取物， 得到乙酸乙酯相。 然后采用 旋转蒸发仪在真空度为60kPa， 温度40的条件下， 浓缩乙酸乙酯相至干， 并回收乙酸乙酯， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物产品。 提取率为1.3。 0047 实施例4 0048 (1)粉碎干燥： 将洗净的薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎， 过24目筛， 采用真空干 燥器在60， 真空度20kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎原料粉末。 0049 (2)索氏提取： 取15克干燥的薰倒牛茎原料粉末于折好的滤纸套中， 放入连接好的 索氏提取器中， 加入体积百分比为45的乙醇水溶液300mL， 80提取2小时， 得提取混合 液。 00

25、50 (3)固液分离： 提取完成后， 用滤纸过滤步骤(2)中的提取混合液， 滤纸下层得到滤 液A， 滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。 0051 (4)滤液A浓缩至干： 采用旋转蒸发仪在真空度为30kPa， 温度40的条件下， 滤液A 浓缩至干， 并回收体积百分比为45的乙醇水溶液， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物。 提取率为 1.9。 0052 实施例5 0053 (1)粉碎干燥： 将薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎， 过100目筛， 采用真空干燥器在 25， 真空度50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎原料粉末。 0054 (2)索氏提取： 取20克干燥的薰倒牛茎原料粉末于折好的滤纸套中， 放入连接好的 索

26、氏提取器中， 加入200毫升三氯甲烷， 75提取4小时， 得提取混合液。 0055 (3)固液分离： 提取完成后， 用滤纸过滤步骤(2)中的提取混合液， 滤纸下层得到滤 液A， 滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。 0056 (4)滤液A浓缩至干： 采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa， 温度80的条件下， 浓缩 滤液A至干， 并回收三氯甲烷溶液， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物。 0057 (5)精制： 采用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮提取物， 得到乙酸乙酯相。 然后采用 旋转蒸发仪在真空度为40kPa， 温度30的条件下， 浓缩乙酸乙酯相至干， 并回收乙酸乙酯， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物产品。 提取率为1.3

27、。 0058 实施例6 0059 (1)粉碎干燥： 将薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎， 过100目筛， 采用真空干燥器在 25， 真空度50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎原料粉末。 0060 (2)索氏提取： 取15克干燥的薰倒牛茎原料粉末于折好的滤纸套中， 放入连接好的 说 明 书 4/6 页 7 CN 104523777 B 7 索氏提取器中， 加入体积百分比为75的乙醇水溶液300mL， 80提取24小时， 得提取混合 液。 0061 (3)固液分离： 提取完成后， 用滤纸过滤步骤(2)中的提取混合液， 滤纸下层得到滤 液A， 滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。 0062 (4)滤液A浓缩至干

28、： 采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa， 温度80的条件下， 浓缩 滤液A至干， 并回收体积百分比为75的乙醇水溶液， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物。 0063 (5)精制： 采用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮提取物， 得到乙酸乙酯相。 然后采用 旋转蒸发仪在真空度为40kPa， 温度30的条件下， 浓缩乙酸乙酯相至干， 并回收乙酸乙酯， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物产品。 提取率为2.6。 0064 对比实施例1浸提法提取薰倒牛总黄酮及薰倒牛总黄酮提取物 0065 将薰倒牛茎放置恒温培养箱中60烘干， 粉碎。 过10目筛， 70乙醇溶液和薰倒牛 的比例为1:20， 在35下， 浸提60分钟， 使用4层纱

29、布过滤2次， 得滤液。 将滤液浓缩至干， 并 回收体积百分比为70的乙醇水溶液， 得到薰倒牛茎总黄酮提取物I(简称JTFI)。 提取率为 1.18。 0066 对比实施例2超声提取法提取薰倒牛总黄酮及薰倒牛总黄酮提取物 0067 将薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎， 过100目筛， 采用真空干燥器在25， 真空度 50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎原料粉末。 将锥形瓶放入超声波清洗仪中， 选用乙醇 超声提取薰倒牛茎总黄酮。 超声提取条件为： 体积百分比为75的乙醇水溶液， 超声提取时 间55min， 超声提取温度是35， 超声提取功率600W， 乙醇水溶液和薰倒牛茎粉末体积质量 比37:1mL

30、/g。 提取完成后， 用滤纸过滤薰倒牛茎粉末与乙醇溶液的混合液， 滤纸下层得到滤 液， 滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。 采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa， 温度40的条件下， 浓 缩滤液至干， 并回收体积百分比为75的乙醇水溶液， 得到薰倒牛茎总黄酮的提取物II。 采 用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮的粗提物， 得到乙酸乙酯相。 然后采用旋转蒸发仪在真空 度为40kPa， 温度30的条件下， 浓缩乙酸乙酯相至干， 并回收乙酸乙酯， 得到薰倒牛茎总黄 酮提取物产品II(简称CSFII)。 提取率为2.2。 0068 效果实施例抗菌实验 0069 (1)菌液的制备 0070 分别挑取LB平板上数个单个菌

31、落， 悬于无菌生理盐水中， 涡旋振荡器上震荡15s充 分混匀， 并校正其浊度为0.5麦氏， 此时细菌菌悬液浓度为1.5*108CFU/mL。 0071 (2)药液的准备 0072 实验组： 取同体积发明实施例1、 对比实施例1和对比实施例2得到的薰倒牛总黄酮 提取物和DMSO， 放于EP管中， 使其二者充分溶解混匀； 0073 对照组： 取同体积的生理盐水和DMSO， 放于EP管中， 使其二者充分溶解混匀。 0074 (3)药物敏感实验 0075 采用牛津杯实验， 吸取一定浓度的指示菌菌悬液0.4mL至的LB琼脂平板上， 用无菌 玻耙涂布均匀， 并用镊子将无菌的牛津杯轻轻放入培养皿中， 在水平

32、放置的平皿中均匀地 放置4只牛津杯。 分别吸取本发明实施例1薰倒牛提取物、 浸提法得到的薰倒牛总黄酮提取 物(JTFI)、 超声提取法得到的薰倒牛总黄酮提取物(CSFII)和DMSO对照组各0.20mL放入牛 津杯中。 将上述牛津杯置于37中培养1824小时， 测量抑菌圈直径， 重复实验3次， 取平均 说 明 书 5/6 页 8 CN 104523777 B 8 值。 0076 (4)结果 0077 数据表明， 本发明实施例1的薰倒牛提取物、 浸提法得到的薰倒牛总黄酮提取物 (JTFI)、 超声提取法得到的薰倒牛总黄酮提取物(CSFII)对大肠杆菌都有抑菌效应， 而对照 组没有产生抑菌环， 并

33、且本发明实施例1的薰倒牛提取物产生的抑菌环直径1.710.1厘 米， 明显大于浸提法得到的薰倒牛总黄酮提取物(JTFI)、 超声提取法得到的薰倒牛总黄酮 提取物(CSFII)产生的抑菌环的直径1.010.1厘米， 具体见图1， 其中， 1为浸提法得到的薰 倒牛总黄酮提取物(JTFI)； 2为超声提取法得到的薰倒牛总黄酮提取物(CSFII)； 3为本发明 实施例1薰倒牛提取物； 4为对照组。 有上述结果可以看出： 本发明的薰倒牛总黄酮提取物可 替代抗生素， 从而克服抗生素导致多重耐药病原菌产生的问题， 在药物领域有着广阔的应 用前景。 说 明 书 6/6 页 9 CN 104523777 B 9 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 10 CN 104523777 B 10