1、10申请公布号CN104072556A43申请公布日20141001CN104072556A21申请号201410266522622申请日20140616C07H17/07200601C07H1/0820060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种制备蜡菊苷的方法57摘要本发明公开了一种制备蜡菊苷的方法。方法步骤如下（1）取野牡丹的叶粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解47天，酶解原料用温水浸泡提取23次，得到提取液；（2）提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液
2、浓缩得粗提物；（3）把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得蜡菊苷。采用本发明制备蜡菊苷，方法操作简单、效率高、制备量大，所得产品纯度高。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104072556ACN104072556A1/1页21一种制备蜡菊苷的方法，其特征在于以下步骤（1）取野牡丹的叶粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解47天，酶解原料用温水浸泡提取23次，得到提取液；（2）提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得粗提物；（3）把上
3、述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得蜡菊苷。2据权利要求1所述的制备蜡菊苷的方法，其特征在于步骤（1）中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的35。3根据权利要求1所述的制备蜡菊苷的方法，其特征在于步骤（2）中所述的超滤膜为截留分子量200010000的中空纤维素超滤膜，纳滤膜为截留分子量200400的中空纤维素纳滤膜。4根据权利要求1所述的制备蜡菊苷的方法，其特征在于步骤（3）中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统为乙酸乙酯正丁醇水组合，比例为352457，下相为流动相，上相为固定相。权利要求书CN104072556A1/3页3一种制备蜡菊苷的
4、方法技术领域0001本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种制备蜡菊苷的方法。背景技术0002蜡菊苷（HELICHRYSOSIDE），MP181184，分子式C22H30O8，分子量61051，结构式为蜡菊苷是一种黄酮苷类化合物。现代药理研究表明，蜡菊苷具有抗高血压作用。静注本品能降低自发性高血压大鼠的血压，其作用机制是由于抑制交感神经和直接扩张血管。蜡菊苷来源于牡丹科MELASTOMATACEAE野牡丹MELASTOMACANDIDUMDDON的叶。0003通过检索，国内尚未见采用超临界萃取技术制备蜡菊苷的方法的相关报道。发明内容0004本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种制备
5、蜡菊苷的方法。0005本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种制备蜡菊苷的方法，其特征在于以下步骤（1）取野牡丹的叶粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解47天，酶解原料用温水浸泡提取23次，得到提取液；（2）提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得粗提物；（3）把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得蜡菊苷。0006步骤（1）中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的说明书CN104072556A2/3页435。0007步骤（2）中所述的超滤膜为截留分子量200010000的中空纤维素超滤膜，纳滤膜为截留分
6、子量200400的中空纤维素纳滤膜。0008步骤（3）中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统为乙酸乙酯正丁醇水组合，比例为352457，下相为流动相，上相为固定相。0009本发明采用生物酶发酵，可以缩短提取周期，提高提取率；采用膜过滤技术分离，物理方法除杂，操作简单，不污染环境；采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，制备量大。具体实施方式0010下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。0011实施例1取纤维酶15G溶于5L水，加入粉碎的5KG野牡丹的叶中拌匀，常温酶解5天，酶解原料用70温水浸泡提取2次，每次加40KG，提取液过滤后用截留分子量2000的中空纤维素超滤膜超
7、滤，透过液再用截留分子量200的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物12G。取乙酸乙酯、正丁醇、水按325混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900RPM，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为25ML/MIN，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色蜡菊苷702MG，经HPLC检测，纯度982。0012实施例2取淀粉酶5和果胶酶10G溶于5L水，加入粉碎的5KG野牡丹的叶中拌匀，常温酶解4天，酶解原料用60温水浸泡提取3次，每次加30KG，提取液过滤后用截留分子量6000
8、的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量300的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物13G。取乙酸乙酯、正丁醇、水按547混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机850RPM，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为25ML/MIN，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色蜡菊苷598MG，经HPLC检测，纯度977。0013实施例3取淀粉酶5和果胶酶10G溶于5L水，加入粉碎的5KG野牡丹的叶中拌匀，常温酶解7天，酶解原料用60温水浸泡提取2次，每次加30KG，提取液过滤后
9、用截留分子量10000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量300的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物15G。取乙酸乙酯、正丁醇、水按325混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800RPM，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ML/MIN，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色蜡菊苷715MG，经HPLC检测，纯度981。0014实施例4取纤维素酶15和果胶酶10G溶于5L水，加入粉碎的5KG野牡丹的叶中拌匀，常温酶解说明书CN104072556A3/3页54天，酶解原料用60温水浸泡提取3次，每次加35KG，提取液过滤后用截留分子量5000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量400的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物22G。取乙酸乙酯、正丁醇、水按435混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机1000RPM，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ML/MIN，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色蜡菊苷569MG，经HPLC检测，纯度982。说明书CN104072556A
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