双孢菇蛋白酶解肽口服液的制备方法.pdf

1、(10)授权公告号 CN 102038264 B (45)授权公告日 2012.08.22 CN 102038264 B *CN102038264B* (21)申请号 201010617804.8 (22)申请日 2010.12.31 A23L 2/38(2006.01) A23L 2/84(2006.01) A23L 1/08(2006.01) A23L 1/28(2006.01) (73)专利权人 山西师范大学 地址 041004 山西省临汾市贡院街 1 号 (72)发明人 李桂峰 王向东 赵国建 孟秀娟 (74)专利代理机构 太原科卫专利事务所 ( 普通 合伙 ) 14100 代理人 朱

2、源 (54) 发明名称 双孢菇蛋白酶解肽口服液的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种双孢菇蛋白酶解肽口服液 的制备方法， 选择新鲜的双孢菇原料打浆得到双 孢菇浆液， 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准 确称量酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶加入水解反应 器中， 加热到 50 60， 调节 pH 值使其维持在 4.5 5.5， 搅拌下酶解 5 6h， 当蛋白质酶解到 预定水解度 65% 时将蛋白酶灭活， 离心、 浓缩， 再 经过调配、 澄清、 灌装、 灭菌后即可得到成品。本 发明所得肽含量高， 制得的口服液色泽金黄、 口感 好、 无腥味， 产品安全性好、 营养价值高， 工艺简 单， 操作容易， 设备

3、投资少， 生产成本低的优点， 适 合于工业化生产。 (51)Int.Cl. 审查员 李文昊 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种双孢菇蛋白酶解肽口服液的制备方法， 其特征是包括以下步骤 ： 原料预处理 ： 选择新鲜的双孢菇原料， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1-1.5 的比例混 合， 打浆得到双孢菇浆液 ； 酶解 ： 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确称量占双孢菇浆液质量0.55%0.60%的 酸性蛋白酶和 0.20% 0.25% 的木瓜蛋白酶加入水解反应器中， 加热到 5

4、0 60， 调节 pH 值使其维持在 4.5 5.5， 搅拌下酶解 5 6h ； 灭酶 ： 当蛋白质酶解到预定水解度 65% 时， 停止搅拌， 移出反应器， 迅速升温到 95， 加 热 10min， 将蛋白酶灭活 ； 离心分离 ： 酶解液在 4000 rpm 离心 20min， 收集上清液， 即为双酶复合水解所得的双孢 菇混合肽 ； 浓缩 ： 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/2 1/4 ； 调配 ： 以上所得的浓缩液中加入占浓缩液质量 5 10% 蔗糖、 1 3% 蜂蜜、 0.2 0.3% 柠檬酸、 0.05 0.2% 黄原胶和羧甲基纤维素钠， 调配双孢菇蛋白酶

5、解肽口服液 ； 澄清 ： 将所得双孢菇蛋白酶解肽口服液中加入 0.1 1% 的食品级壳聚糖， 高速搅拌均 匀， 再静置， 自然澄清 3 6h， 得到澄清透明上清液后， 进行灌装、 灭菌， 即可得到成品。 2. 根据权利要求 1 所述的双孢菇蛋白酶解肽口服液的制备方法， 其特征在于 ： 在原料 预处理时， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1 的比例混合， 打浆 2-3min， 得到双孢菇浆液。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的双孢菇蛋白酶解肽口服液的制备方法， 其特征在于 ： 在 酶解时， 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确称量占双孢菇浆液质量 0.58% 的酸性蛋白 酶和0.22%的木瓜

6、蛋白酶加入水解反应器中， 加热到55， 用0.1M的HCl溶液调节pH值使 其维持在 5.0， 酶解过程中要不断搅拌， 并维持稳定的温度和 pH 值， 酶解 5 6h。 4. 根据权利要求 1 或 2 所述的双孢菇蛋白酶解肽口服液的制备方法， 其特征在于 ： 浓 缩时， 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/3。 5. 根据权利要求 3 所述的双孢菇蛋白酶解肽口服液的制备方法， 其特征在于 ： 浓缩时， 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/3。 权 利 要 求 书 CN 102038264 B 2 1/4 页 3 双孢菇蛋白酶解肽口服液的制

7、备方法 技术领域 0001 本发明属于营养品和保健品技术领域， 涉用一种以双孢菇为原料的口服液。 背景技术 0002 活性肽是当前国际药学和食品界热门的研究课题和极具发展前景的功能因子， 既 容易被人体吸收， 又具有延缓衰老、 抑制肿瘤、 调节激素、 提高免疫、 抗菌、 抗病毒、 降血压和 降血脂等功能。目前已经应用于生物制药、 保健品、 食品、 生物试剂、 动物饲料等领域， 如胰 岛素、 脑活素、 胶原肽、 乳肽、 鹿肽、 大米肽、 大豆肽、 蛋清肽、 血肽等。 0003 双孢菇是一种世界性栽培的重要食用菌， 中国是世界上第一大双孢菇的生产国和 出口国， 但其深加工水平很落后， 高附加值的产

8、品几乎没有。 双孢菇蛋白质含量居食用菌之 首， 每100g干菇蛋白质为3840g， 含有18种氨基酸， 其中8种是人体必须的氨基酸， 并且 赖氨酸和亮氨酸含量相当丰富， 还含有丰富的维生素 B1、 B2、 C、 D、 P， 具有降血脂、 抗病毒、 抗 肿瘤、 增强机体免疫力等保健功能。 因此， 用双孢菇生产富含活性肽保健品具有很好的商业 价值和应用前景， 但国内外关于双孢菇蛋白酶解肽及其产品尚未见报道。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、 易控制的双孢菇蛋白酶解肽口 服液的制备方法。 0005 解决以下问题， 本发明采用的技术方案是 ： 一种双孢菇蛋白酶解肽口服液

9、的制备 方法， 包括以下步骤 ： 0006 原料预处理 ： 选择新鲜的双孢菇原料， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1-1.5 的比 例混合， 打浆得到双孢菇浆液 ； 0007 酶解 ： 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确称量占双孢菇浆液质量 0.55% 0.60%的酸性蛋白酶和0.20%0.25%的木瓜蛋白酶加入水解反应器中， 加热到5060， 调节 pH 值使其维持在 4.5 5.5， 搅拌下酶解 5 6h ； 0008 灭酶 ： 当蛋白质酶解到预定水解度 65% 时， 停止搅拌， 移出反应器， 迅速升温到 95， 加热 10min， 将蛋白酶灭活 ； 0009 离心分离 ： 酶解液在 4

10、000 rpm 离心 20min， 收集上清液， 即为双酶复合水解所得的 双孢菇混合肽 ； 0010 浓缩 ： 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/2 1/4 ； 0011 调配 ： 以上所得的浓缩液中加入占浓缩液质量 5 10% 蔗糖、 1 3% 蜂蜜、 0.2 0.3% 柠檬酸、 0.05 0.2% 黄原胶和羧甲基纤维素钠， 调配双孢菇蛋白酶解肽口服液 ； 0012 澄清 ： 将所得双孢菇蛋白酶解肽口服液中加入 0.1 1% 的食品级壳聚糖， 高速搅 拌均匀， 再静置， 自然澄清 3 6h， 得到澄清透明上清液后， 再进行灌装、 灭菌， 即可得到成 品。 说 明

11、 书 CN 102038264 B 3 2/4 页 4 0013 做为优选的方案， 在原料预处理时， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1 的比例混合， 打浆 2-3min， 得到双孢菇浆液。 0014 做为优选的方案， 在酶解时， 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确量取占双孢菇 浆液质量 0.58% 的酸性蛋白酶和 0.22% 的木瓜蛋白酶加入水解反应器中， 加热到 55， 用 0.1M 的 HCl 溶液调节 pH 值使其维持在 5.0， 酶解过程中要不断搅拌， 并维持稳定的温度和 pH 值， 酶解 5 6h。 0015 做为优选的方案， 浓缩时 ： 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之

12、体积减小 到原来的 1/3。 0016 本发明以双孢菇为原料， 采用复合酶生物酶解技术制备双孢菇肽口服液， 该方法 通过原料预处理， 选择合适的酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行水解， 优化水解条件使蛋白质 的水解率达到65%以上， 再灭酶、 离心分离、 浓缩， 所得产物采用Sephadex-50凝胶柱层析分 析， 所得肽分子量主要分布在 600 3000D 之间， 制得的口服液色泽金黄、 口感好、 无腥味， 产品安全性好、 营养价值高。 0017 本发明所述方法的酶解反应条件温和， 反应温度低， 时间短， 产物容易控制， 整个 生产过程无污染， 产品安全性好， 所得产品具有口感好、 肽含量高、 营养

13、成分保存率高、 易于 消化吸收， 可用于生物制药和营养保健品 ； 并且具有工艺简单， 操作容易， 设备投资少， 生产 成本低的优点， 适合于工业化生产。 具体实施方式 0018 实施例 1 0019 原料预处理 ： 选择新鲜的双孢菇原料， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1 的比例混 合， 打浆 2-3min， 得到双孢菇浆液。 0020 酶解 ： 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确称量占双孢菇浆液质量 0.58% 的酸 性蛋白酶和 0.22% 的木瓜蛋白酶加入水解反应器中， 加热到 55， 用 0.1M 的 HCl 溶液调节 pH 值使其维持在 5.0， 酶解过程中要不断搅拌， 并维持稳定的

14、温度和 pH 值， 酶解 5 6h。 0021 灭酶 ： 当蛋白质酶解到预定水解度 65% 时， 停止搅拌， 移出反应器， 迅速升温到 95， 加热 10min， 将蛋白酶灭活。 0022 离心分离 ： 酶解液在 4000 rpm 离心 20min， 收集上清液， 即为双酶复合水解所得的 双孢菇混合肽。 0023 浓缩 ： 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/3。 0024 调配 ： 以上所得的浓缩液中加入占浓缩液质量8%蔗糖、 2%蜂蜜、 0.2%柠檬酸、 0.1% 黄原胶和羧甲基纤维素钠 （CMCNa） 的混合物， 调配双孢菇蛋白酶解肽口服液。 0025 澄清

15、： 将所得双孢菇蛋白酶解肽口服液中加入 0.5% 的食品级壳聚糖， 高速搅拌均 匀， 再静置， 自然澄清 3 6h， 得到澄清透明上清液后， 进行灌装、 灭菌， 即可得到成品。 0026 实施例 2 0027 原料预处理 ： 原料预处理 ： 选择新鲜的双孢菇原料， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1 的比例混合， 打浆得到双孢菇浆液。 0028 酶解 ： 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确称量占双孢菇浆液质量 0.55% 的酸 性蛋白酶和 0.20% 的木瓜蛋白酶加入水解反应器中， 加热到 50， 用 0.1M 的 HCl 溶液调节 说 明 书 CN 102038264 B 4 3/4 页 5

16、 pH 值使其维持在 4.5， 酶解过程中要不断搅拌， 并维持稳定的温度和 pH 值， 酶解 5 6h。 0029 灭酶 ： 当蛋白质酶解到预定水解度 65% 时， 停止搅拌， 移出反应器， 迅速升温到 95， 加热 10min， 将蛋白酶灭活 ； 0030 离心分离 ： 酶解液在 4000 rpm 离心 20min， 收集上清液， 即为双酶复合水解所得的 双孢菇混合肽 ； 0031 浓缩 ： 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/2 ； 0032 调配 ： 以上所得的浓缩液中加入占浓缩液质量 5% 蔗糖、 1% 蜂蜜、 0.2% 柠檬酸、 0.05% 黄原胶和羧甲基

17、纤维素钠 （CMCNa） 的混合物， 调配双孢菇蛋白酶解肽口服液 ； 0033 澄清 ： 将所得双孢菇蛋白酶解肽口服液中加入 0.1% 的食品级壳聚糖， 高速搅拌均 匀， 再静置， 自然澄清 3 6h， 得到澄清透明上清液后， 进行灌装、 灭菌， 即可得到成品。 0034 实施例 3 0035 原料预处理 ： 原料预处理 ： 选择新鲜的双孢菇原料， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1.5 的比例混合， 打浆得到双孢菇浆液。 0036 酶解 ： 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确称量占双孢菇浆液质量 0.6% 的酸性 蛋白酶和 0.25% 的木瓜蛋白酶加入水解反应器中， 加热到 50， 用 0.

18、1M 的 HCl 溶液调节 pH 值使其维持在 5.5， 酶解过程中要不断搅拌， 并维持稳定的温度和 pH 值， 酶解 5 6h。 0037 灭酶 ： 当蛋白质酶解到预定水解度 65% 时， 停止搅拌， 移出反应器， 迅速升温到 95， 加热 10min， 将蛋白酶灭活 ； 0038 离心分离 ： 酶解液在 4000 rpm 离心 20min， 收集上清液， 即为双酶复合水解所得的 双孢菇混合肽 ； 0039 浓缩 ： 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/4 ； 0040 调配 ： 以上所得的浓缩液中加入占浓缩液质量 10% 蔗糖、 3% 蜂蜜、 0.3% 柠檬酸、

19、 0.2% 黄原胶和羧甲基纤维素钠 （CMCNa） 的混合物， 调配双孢菇蛋白酶解肽口服液 ； 0041 澄清 ： 将所得双孢菇蛋白酶解肽口服液中加入 1% 的食品级壳聚糖， 高速搅拌均 匀， 再静置， 自然澄清 3 6h， 得到澄清透明上清液后， 进行灌装、 灭菌， 即可得到成品。 0042 实施例 4 0043 原料预处理 ： 原料预处理 ： 选择新鲜的双孢菇原料， 将双孢菇原料切片后与水以 1:1 的比例混合， 打浆得到双孢菇浆液。 0044 酶解 ： 将双孢菇浆液置于酶解反应器中， 准确称量占双孢菇浆液质量 0.58% 的酸 性蛋白酶和 0.20% 的木瓜蛋白酶加入水解反应器中， 加热

20、到 50， 用 0.1M 的 HCl 溶液调节 pH 值使其维持在 5， 酶解过程中要不断搅拌， 并维持稳定的温度和 pH 值， 酶解 5 6h。 0045 灭酶 ： 当蛋白质酶解到预定水解度 65% 时， 停止搅拌， 移出反应器， 迅速升温到 95， 加热 10min， 将蛋白酶灭活 ； 0046 离心分离 ： 酶解液在 4000 rpm 离心 20min， 收集上清液， 即为双酶复合水解所得的 双孢菇混合肽 ； 0047 浓缩 ： 将离心收集的上清液进行旋转蒸发浓缩， 使之体积减小到原来的 1/3 ； 0048 调配 ： 以上所得的浓缩液中加入占浓缩液质量6%蔗糖、 3%蜂蜜、 0.2%柠檬酸、 0.1% 黄原胶和羧甲基纤维素钠 （CMCNa） 的混合物， 调配双孢菇蛋白酶解肽口服液 ； 0049 澄清 ： 将所得双孢菇蛋白酶解肽口服液中加入 0.4% 的食品级壳聚糖， 高速搅拌均 说 明 书 CN 102038264 B 5 4/4 页 6 匀， 再静置， 自然澄清 3 6h， 得到澄清透明上清液后， 进行灌装、 灭菌， 即可得到成品。 说 明 书 CN 102038264 B 6