1、(10)授权公告号 CN 103181324 B (45)授权公告日 2014.06.18 CN 103181324 B (21)申请号 201310094393.2 (22)申请日 2013.03.23 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 甘肃农业大学 地址 730070 甘肃省兰州市安宁区迎门村 1 号 (72)发明人 柳福智 (74)专利代理机构 兰州振华专利代理有限责任 公司 62102 代理人 张建民 CN 1313027 A,2001.09.19, 全文 . 浩仁塔本等 . 黑果枸杞的组织培养 . 植物生 理学通讯 .2005, 第 41 卷 ( 第 5 期 )
2、, 第 631 页 第 1 至 4 节。. 乔永旭等 . 宁夏枸杞再生体系的建立 . 江苏 农业科学 .2011,( 第 01 期 ), 第 72 页第 1.2.2 节至 1.2.5 节以及第 73 页第 2.3 节 . (54) 发明名称 黑果枸杞优质种苗快速繁殖的方法 (57) 摘要 本发明涉及一种黑果枸杞优质种苗快速繁殖 的方法。本发明通过下述顺序步骤实现的 ： 首先 将种子流水冲洗， 先用 75% 酒精消毒， 无菌水冲洗 3 4 次 ； 再用 0.1% 的升汞消毒， 无菌水冲洗 3 4 次后将种子接种于 MS 培养基中培养无菌苗， 培 养 1 个月后， 将无菌苗的茎杆剪下， 切成 0.
3、5cm 长 短 的 茎 段， 接 入 MS+KH2PO413.5mg/L+NAA0.1mg/ L 培养基中继续进行培养。本发明的优点是 ： 无 菌苗生根率达 100%， 可快速繁殖黑果枸杞无菌苗 木， 周期短， 不受季节、 气候、 自然灾害等因素的影 响， 并可实现工厂化生产。 利用这种技术可以解决 药用植物的繁殖能力低、 资源匮乏、 农药残留等诸 多问题。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 王涛 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书2页 (10)授权公告号 CN 103181324 B CN 103
4、181324 B 1/1 页 2 1. 一种黑果枸杞优质种苗快速繁殖的方法， 该方法有以下顺序步骤 ： a、 首先选择黑果枸杞优质种子用流水冲洗 2 3h ； b、 将冲洗后的种子用 75% 酒精消毒 1min, 然后将酒精消毒后的种子用无菌水冲洗 3 4 次 ； c、 将无菌水冲洗后的种子再用 0.1% 的升汞消毒 5min， 然后将升汞消毒后的种子用无 菌水冲洗 3 4 次 ； d、 最后将经过灭菌处理的种子接种于 MS 培养基中培养无菌苗， 培养温度为 24 26， 光照强度为 1500 LX 2000LX， 光照时间为 24h/d ； e、 培养1个月后， 将无菌苗的茎杆剪下， 切成0
5、.5cm长短的茎段， 于无菌条件下接入MS+ KH2PO4 13.5mg/L +NAA 0.1mg/L培养基中进行无菌苗的快速扩繁培养， 光照强度为2000LX， 光照时间为 12h/d 16h/d。 权 利 要 求 书 CN 103181324 B 2 1/2 页 3 黑果枸杞优质种苗快速繁殖的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种黑果枸杞培育方法， 更具体地说涉及一种黑果枸杞优质种苗快速 繁殖的方法。 背景技术 0002 黑果枸杞 （Lycium ruthenicum Murr.） 为茄科枸杞， 属于一种盐生药用植物， 在 我国主要分布在宁夏、 山西、 甘肃、 青海、 新疆、 西藏等省区
6、。 黑果枸杞用途广泛， 其果实中含 有多种人体必需的氨基酸和微量元素， 可提高人体免疫能力 ； 从果汁中提取的黑果枸杞色 素稳定性好、 着色力强， 是国内急需的理想食用天然花色甙， 不但可应用于药品和食品中， 而且可作为天然染料应用于轻纺工业， 是迄今为止发现原花青素含量最高的野生植物。同 时， 黑果枸杞具有抗旱、 抗寒、 耐盐碱、 根蘖性强和耐土壤贫瘠等诸多优点， 是盐碱地治理、 护坡、 防止水土流失的良好树种。因此， 黑果枸杞无论在经济产品开发， 还是在生态环境治 理方面都具有广泛的市场前景和开发潜力， 可以成为医药保健、 经济林建设和盐碱地生物 防治的重要经济树种。目前， 黑果枸杞的研究
7、绝大多数集中在对其生理生态、 有效成分分 析、 开发利用以及治理荒漠化和野生种源驯化等方面， 而关于黑果枸杞组织培养与快速繁 殖方面的研究报到很少。浩仁塔本等 （2005） 利用带腋芽的茎段对黑果枸杞进行了分化生 根及愈伤组织诱导不定芽增殖进行了研究， 而有关黑果枸杞优质种苗快速繁殖方面的研究 还未见报道。 目前甘肃省黑果枸杞野生资源主要分布区自然条件恶劣， 植被退化严重， 甚至 成片死亡， 已对黑果枸杞的正常生存造成了严重威胁， 基本处于濒危状态。 发明内容 0003 本发明要解决的技术问题是 ： 解决我省黑果枸杞品种选育和良种繁殖的问题， 解 决种子繁殖周期长的问题， 提供一种黑果枸杞优质
8、种苗快速繁殖的方法， 获得优质种苗， 缩 短黑果枸杞繁殖周期， 加快黑果枸杞良种繁育进程， 可进行工厂化大规模生产， 满足市场对 黑果枸杞的需求， 保护野生黑果枸杞自然资源和良好的自然生态环境。 0004 本发明通过下述顺序步骤实现的 ： 0005 a、 首先选择黑果枸杞优质种子用流水冲洗 2 3h ； 0006 b、 将冲洗后的种子用75%酒精消毒1min,然后将酒精消毒后的种子用无菌水冲洗 3 4 次 ； 0007 c、 将无菌水冲洗后的种子再用 0.1% 的升汞消毒 5min， 然后将升汞消毒后的种子 用无菌水冲洗 3 4 次 ； 0008 d、 最后将经过灭菌处理的种子接种于 MS 培
9、养基中培养无菌苗， 培养温度为 24 26， 光照强度为 1500 LX 2000LX， 光照时间为 24h/d ； 0009 e、 培养 1 个月后， 将无菌苗的茎杆剪下， 切成 0.5cm 长短的茎段， 于无菌条件下接 入 MS+ KH2PO4 13.5mg/L +NAA 0.1mg/L 培养基中进行无菌苗的快速扩繁培养， 光照强度为 2000LX， 光照时间为 12h/d 16h/d。 说 明 书 CN 103181324 B 3 2/2 页 4 0010 本发明利用组织培养方法快速繁殖黑果枸杞无菌苗的茎杆， 其优点是 ： 使无菌苗 生根率达100%， 可快速繁殖黑果枸杞无菌苗木。 周期
10、短， 不受季节、 气候、 自然灾害等因素的 影响， 并可实现工厂化生产。利用这种技术可以解决药用植物的繁殖能力低、 资源匮乏、 农 药残留等诸多问题。另一方面我们甘肃是首次采用植物组织培养技术， 这对甘肃黑果枸杞 新种质资源进行快速繁殖， 不仅可以满足市场需求， 而且还在防风固沙、 保护生态环境和保 护种质资源等方面具有战略意义。 具体实施方式 0011 实施例 1 0012 本发明有下述顺序步骤 ： 0013 a、 首先选择黑果枸杞优质种子用流水冲洗 2 3h ； 0014 b、 将冲洗后的种子用75%酒精消毒1min,然后将酒精消毒后的种子用无菌水冲洗 3 4 次 ； 0015 c、 将无
11、菌水冲洗后的种子再用 0.1% 的升汞消毒 5min， 然后将升汞消毒后的种子 用无菌水冲洗 3 4 次 ； 0016 d、 最后将经过灭菌处理的种子接种于 MS 培养基中培养无菌苗， 培养温度为 24， 光照强度为 1500 LX， 光照时间为 24h/d ； 0017 e、 培养 1 个月后， 将无菌苗的茎杆剪下， 切成 0.5cm 长短的茎段， 于无菌条件下接 入 MS+ KH2PO4 13.5mg/L +NAA 0.1mg/L 培养基中继续进行无菌苗的快速扩繁培养， 光照强 度为 2000LX， 光照时间为 12h/d。 0018 实施例 2 0019 实施例2与实施例1的方法相同，
12、所不同的是步骤d中无菌苗的培养温度为25， 光照强度为 1800LX。步骤 e 中光照时间为 14h/d。 0020 实施例 3 0021 实施例3与实施例1的方法相同， 所不同的是步骤d中无菌苗的培养温度为26， 光照强度为 2000LX。步骤 e 中光照时间为 16h/d。 0022 综上所述 ： 该项技术使无菌苗生根率达 100%， 可快速繁殖黑果枸杞无菌苗木。甘 肃是首次采用黑果枸杞无菌苗茎杆快速扩繁技术， 这对甘肃黑果枸杞新种质资源进行快速 繁殖， 不仅可以满足市场需求， 而且还在防风固沙、 保护生态环境和保护种质等方面具有战 略意义。 说 明 书 CN 103181324 B 4
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