一种灵仙新苷的制备方法.pdf

1、10申请公布号CN104072626A43申请公布日20141001CN104072626A21申请号201310097384922申请日20130326C08B37/0020060171申请人正大天晴药业集团股份有限公司地址222006江苏省连云港市新浦区巨龙北路8号72发明人李洋张喜全刘利民李超54发明名称一种灵仙新苷的制备方法57摘要本发明为一种灵仙新苷的制备方法，涉及天然药物领域，具体涉及一种从中药威灵仙中提取灵仙新苷的工业化制备方法。其特征是将含有威灵仙的药材的用热水回流提取，大孔树脂吸附提取液后，经水乙醇溶液梯度洗脱分离出威灵仙总皂苷，再将威灵仙总皂苷用特定的无水有机溶剂加热回流提

2、取，提取液干燥后经丙酮水溶液低温结晶得到的产物即为灵仙新苷。本发明提供的灵仙新苷生产工艺成本低廉，工艺流程简单，灵仙新苷得率达25以上，产品纯度达90以上，适合大规模工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页10申请公布号CN104072626ACN104072626A1/1页21一种灵仙新苷的制备方法，包括以下步骤步骤1，取威灵仙药材，热水回流提取，过滤，滤液经大孔树脂吸附后，依次分别用水、1525乙醇液、4060乙醇液洗脱大孔树脂，每次均洗脱至流出液无色，收集4060乙醇洗脱液并干燥得粉末A，即威灵仙总皂苷；步

3、骤2，用无水有机溶剂搅拌回流提取A，趁热过滤后取滤液静置沉淀，再过滤取沉淀干燥得粉末B，即灵仙新苷粗品；步骤3，粉末B用水溶解后加入丙酮，低温静置析晶得粉末C，即精制后的灵仙新苷。2权利要求1所述的方法，其中步骤1热水用量为威灵仙药材的515倍量，热水回流提取次数为24次，每次回流时间为13小时。3权利要求1所述的方法，其中步骤1大孔树脂型号选自D101型、HPD100型、HPD200型和HD300型。4权利要求1所述的方法，其中步骤2无水有机溶剂选自乙醇、甲醇中的一种或两种的混合液。5权利要求1所述的方法，其中步骤2无水有机溶剂用量为粉末A质量的4070倍，回流提取次数为13次，提取时间为1

4、3小时。6权利要求1所述的方法，其中步骤1和2的干燥方法选自冷冻干燥、常压干燥、微波干燥、红外线干燥和减压干燥。7权利要求1所述的方法，其中步骤3溶解粉末B的水溶液用量为粉末B质量的154倍，加入丙酮量为水溶液质量的24倍，放置时间为818小时。8权利要求1所述的方法，其中步骤3丙酮溶液低温析晶的温度范围为10至10。权利要求书CN104072626A1/4页3一种灵仙新苷的制备方法技术领域0001本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种从中药威灵仙中提取灵仙新苷的工业化制备方法。背景技术0002中药威灵仙来源于毛茛科植物威灵仙CLEMATISCHINENSISOSBECK、棉团铁线莲CLEMAT

5、ISHEXAPETALAPALL或东北铁线莲CLEMATISMANSHURICARUPR的干燥根及根茎。秋季采挖，除去泥沙，晒干制得，具祛风湿、通经络、止痛等功效。灵仙新苷是威灵仙的皂苷提取物，分子式为C82H134O43，分子量1806，结构式如下式所示灵仙新苷占总皂苷部分50以上，是威灵仙总皂苷药理活性的主要物质基础，具有重要的应用价值。吕雪发表的“灵仙新苷镇痛抗炎作用的实验研究”表明其具有较强的抗炎镇痛作用，专利2011103012878“灵仙新苷的调血脂、抗动脉粥样硬化及抗心肌缺血作用”表明其具有治疗心血管疾病的用途。0003专利2009100306603公开了威灵仙总皂苷和灵仙新苷的

6、提取制备方法，包括4种灵仙新苷的精制方法。但如何获得高纯度并适合工业化生产的灵仙新苷的提取方法，仍是目前需要解决的技术问题。说明书CN104072626A2/4页4发明内容0004本发明的目的在于提供一种灵仙新苷的提取工艺，包括如下步骤1取威灵仙药材，热水回流提取，过滤，滤液用大孔树脂吸附后，依次分别用水、1525乙醇液、4060乙醇液洗脱大孔树脂，每次均洗脱至流出液无色，收集4060乙醇洗脱液并干燥得粉末A，即威灵仙总皂苷；2用无水有机溶剂搅拌回流提取A，趁热过滤后取滤液静置沉淀，再过滤取沉淀干燥得粉末B，即灵仙新苷粗品；3粉末B用水溶解后加入丙酮，低温静置析晶得粉末C，即精制后的灵仙新苷。

7、0005上述步骤1中，其中回流用热水为威灵仙药材的515倍量，优选为810倍量；回流提取次数为24次，优选3次；回流时间为13小时，优选2小时。0006上述步骤1中，其中大孔树脂型号选自D101型、HPD100型、HPD200型和HD300型，优选D101型大孔树脂。0007上述步骤1中，其中依次分别用水、1525乙醇液、4060乙醇液洗脱大孔树脂，每次均洗脱至流出液无色，亦可以描述为依次用1216倍量水、912倍量1525乙醇溶液、57倍量4060乙醇溶液洗脱大孔树脂。0008上述步骤2中，其中有机溶剂的用量为粉末A质量的4070倍，优选4060倍；回流提取次数为14次，优选2次；回流时间为

8、14小时，优选23小时。0009上述步骤2中，其中无水有机溶剂选自无水甲醇、乙醇中的一种或两种的混合液，优选无水乙醇。0010上述步骤1和2中，其中干燥方法为常压干燥、微波干燥、红外线干燥、减压干燥和冷冻干燥，优选微波干燥。0011上述步骤3中，其中低温静置温度范围为1010，优选05，放置时间816小时，优选1012小时。0012上述步骤3中，其中水用量为粉末B质量的154倍，优选23倍；丙酮用量为B粉末的水溶液质量的24倍，优选23倍。为提高产物纯度，可再重复析晶一次或多次。0013本发明提供的灵仙新苷生产工艺，提高了产率，降低了成本，简化了工艺流程，使之更适合大规模工业化生产。具体实施方

9、式0014实施例1取威灵仙药材4KG，其药材来源于东北铁线莲，灵仙新苷含量为202，用10倍量热水回流2小时，重复3次，过滤，取滤液上预先处理好的大孔树脂D101后，依次分别用水、20乙醇、50乙醇洗脱至流出液无色，收集50乙醇的洗脱液，微波法浓缩干燥，得威灵仙总皂苷，威灵仙总皂苷用50倍量无水乙醇加热回流提取2次，每次2小时，之后趁热过滤，滤液静置过夜沉淀，次日过滤并收集沉淀，微波法干燥后得灵仙新苷粗品，将粗品以25倍量水溶解，溶解后加入3倍质量于上述溶液的丙酮，05静置过夜，析晶，析出物重结晶一次即得灵仙新苷27G，得率3083，HPLC法测得纯度为9225。0015实施例2取威灵仙药材4

10、KG，其药材来源于毛茛科植物威灵仙，灵仙新苷含量为192。用12倍量热水回流3小时，重复3次，过滤，取滤液上预先处理好的大孔树脂D101说明书CN104072626A3/4页5后，依次分别用水、20乙醇、50乙醇洗脱至流出液无色，收集50乙醇的洗脱液，微波法浓缩干燥，得威灵仙总皂苷，威灵仙总皂苷用70倍量无水乙醇加热回流提取2次，每次3小时，之后趁热过滤，滤液静置过夜沉淀，次日过滤并收集沉淀，微波法干燥后得灵仙新苷粗品，将粗品以3倍量水溶解，溶解后加入25倍质量于上述溶液的丙酮，50静置过夜，析晶，析出物重结晶一次即得灵仙新苷262G，得率3134，HPLC法测得纯度为9189。0016实施例

11、3取威灵仙药材4KG，其药材来源于东北铁线莲，灵仙新苷含量207。用8倍量热水回流2小时，重复3次，过滤，取滤液上预先处理好的大孔树脂D101后，依次分别用水、20乙醇、50乙醇洗脱至流出液无色，收集50乙醇的洗脱液，微波法浓缩干燥，得威灵仙总皂苷，威灵仙总皂苷用40倍量无水甲醇在加热搅拌回流提取2次，每次3小时，之后趁热过滤，滤液静置过夜沉淀，次日过滤并收集沉淀，减压干燥后得灵仙新苷粗品，将粗品以3倍量水溶解，溶解后加入35倍质量于上述溶液的丙酮，05静置过夜，析晶，析出物重结晶一次即得灵仙新苷261G，得率2883，HPLC法测得纯度为9146。0017实施例4取威灵仙药材4KG，其药材来

12、源于东北铁线莲，灵仙新苷含量202。用10倍量热水回流2小时，重复3次，过滤，取滤液上预先处理好的大孔树脂HPD100后，依次分别用水、20乙醇、40乙醇洗脱至流出液无色，收集40乙醇的洗脱液，微波法浓缩干燥，得威灵仙总皂苷，威灵仙总皂苷用50倍量无水乙醇加热搅拌回流提取3次，每次2小时，之后趁热过滤，滤液静置过夜沉淀，次日过滤并收集沉淀，微波法干燥后得灵仙新苷粗品，将粗品以2倍量水溶解，溶解后加入25倍量于上述溶液的丙酮，05静置过夜，析晶，析出物重结晶一次即得灵仙新苷233G，得率2668，HPLC法测得纯度为9252。0018实施例5取威灵仙药材4KG，其药材来源于东北铁线莲，灵仙新苷含

13、量为202。用10倍量热水回流2小时，重复3次，过滤，取滤液上预先处理好的大孔树脂D101后，依次分别用水、25乙醇、55乙醇洗脱至流出液无色，收集55乙醇的洗脱液，微波法浓缩干燥，得威灵仙总皂苷，威灵仙总皂苷用60倍量无水乙醇加热搅拌回流提取2次，每次3小时，之后趁热过滤，滤液静置过夜沉淀，次日过滤并收集沉淀，微波法干燥后得灵仙新苷粗品，将粗品以25倍量水溶解，溶解后加入25倍量于上述溶液的丙酮，05静置过夜，析晶，析出物重结晶一次即得灵仙新苷258G，得率2972，HPLC法测得纯度为9308。0019实施例6取威灵仙药材400KG，其药材来源于东北铁线莲，灵仙新苷含量为202。用10倍量

14、热水回流2小时，重复3次，过滤，取滤液上预先处理好的大孔树脂D101后，依次分别用水、20乙醇、50乙醇洗脱至流出液无色，收集50乙醇的洗脱液，微波法浓缩干燥，得威灵仙总皂苷，威灵仙总皂苷用50倍量无水乙醇加热搅拌回流提取2次，每次2小时，之后趁热过滤，滤液静置过夜沉淀，次日过滤并收集沉淀，微波法干燥后得灵仙新苷粗品，将粗品以25倍量水溶解，溶解后加入25倍质量于上述溶液的丙酮，05静置过夜，析晶，析出物重结晶一次即得灵仙新苷235KG，得率2632，HPLC法测得纯度为9052。0020实施例7取威灵仙药材700KG，其药材来源于东北铁线莲，灵仙新苷含量为202用10倍量热水回流2小时，重复3次，过滤，取滤液上预先处理好的大孔树脂D101后，依次分别用水、20乙醇、50乙醇洗脱至流出液无色，收集50乙醇的洗脱液，微波法浓缩干燥，得威灵仙总皂苷，威灵仙总皂苷用50倍量无水乙醇加热搅拌回流提取2次，每次2小时，之后趁热过滤，滤液静置过夜沉淀，次日过滤并收集沉淀，微波法干燥后得灵仙新苷粗品，将说明书CN104072626A4/4页6粗品以25倍量水溶解，溶解后加入25倍质量于上述溶液的丙酮，05静置过夜，析晶，析出物重结晶一次即得灵仙新苷458KG，得率2944，HPLC法测得纯度为9089。说明书CN104072626A