环孢菌素A形式2的悬浮液.pdf

1、10申请公布号CN104080442A43申请公布日20141001CN104080442A21申请号201280066573322申请日2012111461/559,86620111115USA61K9/0020060171申请人阿勒根公司地址美国加利福尼亚72发明人AV戈雷PS莫汉泰EQ法内斯74专利代理机构北京北翔知识产权代理有限公司11285代理人王媛张广育54发明名称环孢菌素A形式2的悬浮液57摘要本文公开了制备环孢菌素A形式2的悬浮液的方法。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014070986PCT国际申请的申请数据PCT/US2012/065011201211148

2、7PCT国际申请的公布数据WO2013/074625EN2013052351INTCL权利要求书2页说明书9页附图10页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书9页附图10页10申请公布号CN104080442ACN104080442A1/2页21一种制剂，其包含环孢菌素A形式2媒介物。2如权利要求1所述的制剂，其中所述媒介物包含至少一种表面活性剂和至少一种稳定剂。3如权利要求2所述的制剂，其中环孢菌素的浓度是约001至约10。4如权利要求3所述的制剂，其中所述媒介物包含一、二、三、四、五或六种各自选自由以下组成的组的表面活性剂聚氧乙烯20失水山梨糖醇单油酸酯、聚乙

3、二醇660羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯40硬脂酸酯MYRJ52、PLURONICF68、聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯和甘胆酸钠。5如权利要求3所述的制剂，其中所述媒介物包含一、二、三、四、五或六种各自选自由以下组成的组的表面活性剂浓度为约01至约5W/V的聚氧乙烯20失水山梨糖醇单油酸酯、浓度为约01至约5W/V的聚乙二醇660羟基硬脂酸酯、浓度为约01至约5W/V的聚氧乙烯40硬脂酸酯MYRJ52、浓度为约01至约5W/V的PLURONICF68、浓度为约01至约5W/V的聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯和浓度为约01至约5W/V的甘胆酸钠。6如权利要求4所述的制剂，其中所述媒介物包含一、二、三或

4、四种各自选自由以下组成的组的稳定剂羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和羧甲基纤维素。7如权利要求5所述的制剂，其中所述媒介物包含一、二、三或四种各自选自由以下组成的组的稳定剂浓度为约01至约5W/V的羟丙基纤维素、浓度为约01至约5W/V的羟丙基甲基纤维素、浓度为约01至约5W/V的羟乙基纤维素，和浓度为约01至约5W/V的聚乙烯吡咯烷酮，以及浓度为约01至约5W/V的羧甲基纤维素。8如权利要求7所述的制剂，其中所述媒介物进一步包含一、二、三、四、五、六、七、八或九种选自以下的成分甘油、甘露醇、PEMULENTR2、二水合柠檬酸钠、氯化钾、硼酸、十水合硼酸钠和水。9如

5、权利要求7所述的制剂，其中所述媒介物进一步包含一、二、三、四、五、六、七、八或九种选自以下的成分浓度为约10至约22的甘油、浓度为约05的甘露醇、浓度为约001至约01的PEMULENTR2、浓度为约04的二水合柠檬酸钠、浓度为约014的氯化钾、浓度为约025的硼酸、浓度为约041的十水合硼酸钠，以及水。10一种制备环孢菌素制剂的方法，所述方法包括以下步骤混合环孢菌素A形式2与媒介物以形成悬浮液；研磨所述悬浮液。11如权利要求10所述的方法，其中研磨所述悬浮液约10分钟和约120分钟之间。12如权利要求10所述的方法，其中研磨所述悬浮液约60分钟。13一种制剂，其包含环孢菌素A形式2的颗粒；以

6、及媒介物，权利要求书CN104080442A2/2页3其中所述颗粒的平均尺寸D90小于约10M。14如权利要求13所述的制剂，其中所述颗粒的所述平均尺寸小于约1M。15一种治疗病状的方法，所述病状选自干眼症、睑缘炎、睑板腺疾病、角膜敏感性受损、过敏性结膜炎、特应性角膜结膜炎、春季角膜结膜炎和翼状胬肉，所述方法包括向患有这种病状的患者施用如权利要求1至14中任一项所述的制剂的步骤。权利要求书CN104080442A1/9页4环孢菌素A形式2的悬浮液0001相关申请的交叉引用0002本专利申请要求2011年11月15日提交的美国临时专利申请号61/559,866的优先权，所述美国临时专利申请的全部

7、内容以引用的方式并入本文中。技术领域0003本发明涉及纳米技术和药物配制技术的领域。0004发明背景0005环孢素A是一种用于治疗干眼疾病的药物中的活性成分。环孢菌素A不太溶于水，因此目前通过将所述药物溶解于油中以形成乳液或通过混合所述药物与高水平的表面活性剂和/或增溶剂以形成水溶液来配制。本发明人已经发现一种环孢菌素A制剂，其使用环孢菌素A的新型晶体多晶型物以产生包含平均尺寸为约1微米或更小为了正确地阐述所述数字，人发的平均厚度是约100微米的环孢菌素A颗粒的纳米悬浮液。0006环孢菌素A的纳米悬浮液当局部递送至眼睛时可能具有一种或多种优势，包括以下优势0007由于可用于溶解的表面积较大，因

8、此与悬浮液相比生物利用率较高；0008由于颗粒较小，因此在眼睛上滞留较长的时间，从而使生物利用率进一步提高；0009异物感或颗粒刺激的可能性较小，因此减少了眼睛的流泪以及制剂从眼睛的排出；0010制剂中表面活性剂或增溶剂的水平较低，从而提高了药物的耐受性和生物利用率。0011附图简述0012图1示出了与在研磨之前的悬浮液相比的使用高压均质器制备的环孢菌素A形式2纳米悬浮液的粒度分布。0013图2比较了使用不同的表面活性剂和稳定剂制备的环孢菌素A形式2纳米悬浮液的粒度分布。0014图3示出了稀释于含有NACMC的媒介物中的制剂的粒度分布。0015图4示出了与使用形式2的纳米悬浮液相比的使用环孢菌

9、素A形式3的纳米悬浮液在使用微射流机研磨之后的平均粒度。形式2形成纳米悬浮液粒度1M，而形式3不形成纳米悬浮液。0016图5至图13示出了当以单次局部剂量将四种不同的根据本发明的制剂概述于表2中和施用于NZW雌性兔总共两只兔，每只眼睛一种制剂的结果0017图5示出了角膜中的浓度。0018图6概括了药物动力学数据。0019图7示出了球结膜中的浓度。说明书CN104080442A2/9页50020图8示出了睑结膜中的浓度。0021图9概括了球结膜和睑结膜的药物动力学数据。0022图10示出了球结膜中的浓度。0023图11示出了睑结膜中的浓度。0024图12示出了泪腺中的浓度。0025图13概括了泪

10、腺的药物动力学数据。0026图14示出了新型晶形本文指定为形式2、四方晶形本文指定为形式1和斜方晶形本文指定为形式3的CSA的特征X射线粉末衍射XRPD图案。0027图15示出了CSA晶形2的XRPD衍射图。0028图16示出了CSA形式2的水吸附/脱附型态。0029图17示出了从含1PS80的004制剂回收的CSA形式2的MDSC分析结果。0030图18示出了环孢素A形式的模拟XRPD图案。具体实施方式0031环孢菌素A0032环孢菌素ACSA是一种具有以下化学结构的环状肽00330034其化学名称是环E2S,3R,4R3羟基4甲基2甲氨基6辛酰基L2氨基丁酰基N甲基甘氨酰基N甲基亮氨酰基L

11、缬氨酰基N甲基L亮氨酰基L丙氨酰基D丙氨酰基N甲基L亮氨酰基N甲基L亮氨酰基N甲基L缬氨酰基。它也被称为环孢素、环孢素A、环孢霉素以及环孢霉素A。它为加利福尼亚州欧文市的爱力根公司ALLERGAN,INC,IRVINE,CALIFORNIA，即一种包含005W/V环孢菌素的乳液中的活性成分。在美国被批准用于增加患者的泪液产生，已推测所述患者的泪液产生因与干燥性角膜结膜炎相关的眼部发炎而受到抑制。0035环孢菌素A形式2说明书CN104080442A3/9页60036已知环孢菌素A以无定形、液晶形式、四方晶形形式1以及斜方晶形形式3存在。最近已经发现了一种新型晶形，即环孢菌素A形式2。0037C

12、SA形式2的XRPD图案明显不同于四方晶形和斜方晶形图14。当用以X射线源作为CUK辐射、154处于30KV/15MA下的X射线衍射仪扫描时，CSA形式2的主要结晶峰出现在275、88、102、113、127、138、145、156和175分别在约118、100、87、78、70、64、61、56和51的晶格中的D间距，图15。将这些主峰定义为相对于斜方晶形或四方晶形对形式2来说独特的那些峰；以及强度比背景大5倍的峰。0038在一个实施方案中，CSA的新型晶形形式2是环孢菌素A的非化学计量水合物。在另一实施方案中，由下式表示晶形200390040XH2O，0041其中X是水分子数目并且从0至3

13、变化。在一个实施方案中，上式中的X是2。0042在水性悬浮液中，形式2似乎是CSA的动力学稳定形式。含有形式2的悬浮液在存放时未显示向其它已知的多晶形或假晶形式转化。已经发现形式1和无定形形式在水存在下会转化成形式2。0043已经测定了CSA形式2的水合物形式的单晶结构并且将晶体结构参数列于表2中。这些结果表明形式2与环孢素A的其它已知晶形相比是独特的。0044表1CSA形式2的晶体结构解析的晶体数据和数据收集参数。0045说明书CN104080442A4/9页70046这种CSA形式2的不对称单元含有一个环孢素A分子和两个水分子。有可能的是，任何能以氢键结合于水的小分子都能起到空间填充物的作

14、用，这将会产生一系列从斜方二水合物到畸变的单斜二水合物衍变的潜在结构。图8中示出由单晶结构计算出的XRPD图案并且所述XRPD图案与图2中示出的实验图案相匹配。这些匹配图案进一步证实了形式2是环孢素A的独特并且纯的晶形。0047不希望受理论束缚，与KF滴定和蒸气吸附脱附分析VSA组合的热重分析表明CSA形式2是CSA的非化学计量水合物。环孢素形式2的蒸气吸附分析表明新型晶形中的水含量会随相对湿度可逆地变化，如图16中所示。如由调制差示量热MDSC分析所示图17，类似于四方晶形，新型CSA形式在1244下会相变成液晶或无定形形式，随后熔化。0048可以通过以下步骤获得环孢菌素A形式2将005无定

15、形环孢菌素AW/V悬浮于1聚山梨醇酯80中，将溶液加热至65，将它保持在所述温度下24小时，然后通过真空过滤来回收沉淀。然后可使用由此获得的环孢菌素A形式2来产生额外的量，其中使用环孢菌素A形式2作为晶种；在这种方法中，将约30G环孢菌素A悬浮于900ML水含有1W/V聚山梨醇酯80的溶液中，将溶液加热至65，并然后在温度52下用02G环孢菌说明书CN104080442A5/9页8素A形式2接种。然后在约61与65之间的温度下搅拌该溶液约22小时，并然后回收所得沉淀。0049关于CSA形式2的更多细节可以见于美国专利申请号13/480,710，所述美国专利申请的全部内容以引用的方式并入本文中。

16、0050环孢菌素A形式2的悬浮液0051本发明的组合物是环孢菌素A形式2的眼科学上可接受的悬浮液。关于“眼科学上可接受的”，本发明人意指以一定方式配制悬浮液以便当施用于哺乳动物如人的眼睛时无刺激性。在一个实施方案中，组合物是悬浮液；也就是说，它们包含平均粒度大于约1M的分散在整个液体媒介物中的环孢菌素A形式2的颗粒。在另一实施方案中，组合物是纳米悬浮液；也就是说，它们包含平均粒度小于约1M的分散在整个液体媒介物中的环孢菌素A形式2的颗粒。0052在一个实施方案中，悬浮液包含浓度为约0001至约10W/V的环孢菌素A形式2。在一个实施方案中，悬浮液包含浓度为约0001W/V至约001、约0001

17、W/V至约004W/V、约0001W/V至约003W/V、约0001W/V至约002W/V，或约0001W/V至约001W/V的环孢菌素A形式2。在另一实施方案中，悬浮液包含浓度为约001W/V至约005、约001W/V至约004W/V、约001W/V至约003W/V、约001W/V至约002W/V，或约001W/V至约001W/V的环孢菌素A形式2。在另一实施方案中，悬浮液包含浓度为约001W/V至约01、约01W/V至约05W/V、约001W/V至约1W/V，或约1W/V至约10的环孢菌素A形式2。0053例如，悬浮液可以包含约0001W/V、约0002W/V、约0003W/V、约0004

18、W/V、约0005W/V、约0006W/V、约0007W/V、约0008W/V、约0009W/V、约001W/V、约0015W/V、约002W/V、约0025W/V、约003W/V、约0035W/V、约004W/V、约0045W/V、约005W/V、约0055W/V、约006W/V、约0065W/V、约007W/V、约0075W/V、约008W/V、约0085W/V、约009W/V、约0095W/V、约01W/V、约015W/V、约02W/V、约025W/V、约03W/V、约035W/V、约04W/V、约045W/V、约05W/V、约055W/V、约06W/V、约065W/V、约07W/V、约

19、075W/V、约08W/V、约085W/V、约09W/V、约095W/V或约10W/V的环孢菌素A形式2。0054在一个实施方案中，悬浮液包含表面活性剂。在一个实施方案中，表面活性剂选自聚氧乙烯20失水山梨糖醇单油酸酯聚山梨醇酯80、聚乙二醇660羟基硬脂酸酯SOLUTOL、聚氧乙烯40硬脂酸酯MYRJ52POE40硬脂酸酯、PLURONICF68POLAXAMER188、聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯聚山梨醇酯20和甘胆酸钠NAGC。媒介物可以含有所有这些表面活性剂，或其中的一、二、三、四或五种。0055可使用在约0001W/V和约5W/V之间的表面活性剂。在一个实施方案中，悬浮液含有约00

20、01W/V至约1W/V、约0001W/V至约01W/V、约001W/V至约01W/V或约01W/V至约1W/V表面活性剂。例如，悬浮液可以含有约0001W/V、约0002W/V、约0003W/V、约0004W/V、约说明书CN104080442A6/9页90005W/V、约0006W/V、约0007W/V、约0008W/V、约0009W/V、约001W/V、约002W/V、约003W/V、约004W/V、约005W/V、约006W/V、约007W/V、约008W/V、约009W/V、约01W/V、约02W/V、约03W/V、约04W/V、约05W/V、约06W/V、约07W/V、约08W/V、

21、约09W/V、约1W/V、约2W/V、约3W/V、约4W/V或约5W/V表面活性剂。0056当使用超过一种表面活性剂时，悬浮液可以含有相同或不同量的每一表面活性剂。0057除表面活性剂以外，悬浮液还可以包含稳定剂。在一个实施方案中，稳定剂选自羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、和TR2。是由LUBRIZOL公司制造的丙烯酸和丙烯酸C10C30烷酯的高分子量交联共聚物的商品名。TR2是含有高于其它聚合物的疏水基水平的丙烯酸C1030烷酯交联聚合物。媒介物可以含有所有这些稳定剂，或不含有其中任一种，或它可以含有其中的一、二、三、四或五种。0058可使用在约0

22、01W/V和约10W/V之间的稳定剂。在一个实施方案中，悬浮液含有约001W/V至约1W/V，或约001W/V至约01W/V，或约01W/V至约1W/V稳定剂。例如，悬浮液可以含有约001W/V、约002W/V、约003W/V、约004W/V、约005W/V、约006W/V、约007W/V、约008W/V、约009W/V、约01W/V、约02W/V、约03W/V、约04W/V、约05W/V、约06W/V、约07W/V、约08W/V、约09W/V、约1W/V、约2W/V、约3W/V、约4W/V、约5W/V、约6W/V、约7W/V、约8W/V、约9W/V，或约10稳定剂。0059当使用超过一种表面

23、活性剂时，悬浮液可以含有相同或不同量的每一表面活性剂。0060除表面活性剂以外，媒介物还可以包含选自甘油、甘露醇、二水合柠檬酸钠、氯化钾、硼酸和十水合硼酸钠的张力调节剂。根据需要添加张力调节剂以实现所需的张力；媒介物可以含有所有这些张力调节剂，或不含有其中任一种，或它可以含有其中的一、二、三、四或五种。在一个实施方案中，张力调节剂的存在量是在约01W/V和约10W/V之间。当使用超过一种张力调节剂时，悬浮液可以含有相同或不同量的每一张力调节剂。0061悬浮液通常含有足以提供将使悬浮液适于施用于眼睛的所需PH值、张力和其它特征的量的水。0062制备环孢菌素A形式2的悬浮液的方法0063可以通过混

24、合环孢菌素A形式2与适当的如上所述的表面活性剂、稳定剂和张力调节剂以形成悬浮液来制备本发明的制剂。如果需要环孢菌素A的微粒，那么使用高压均质器来研磨悬浮液，所述高压均质器如为可购自马萨诸塞州牛顿市的MICROFLUIDICSINTL公司的高压均质器。环孢菌素形成A2的独特和惊人的性质在于它在必要时可以被研磨以获得平均粒度D90小于1M的悬浮液。由于可用于溶解的表面积较大，因此这种纳米悬浮液中的环孢菌素A的生物利用率高于环孢菌素A的其它大悬浮液；因为较小的说明书CN104080442A7/9页10颗粒使环孢菌素A能够在眼睛上滞留更长的时间，所以进一步提高了生物利用率。纳米悬浮液的较小颗粒得到产生

25、当将制剂滴注于眼睛中时受试者所察觉到的异物感或其它刺激的可能性较小的制剂。而且，因为颗粒较小，所以它们更易于与表面活性剂和稳定剂缔合，从而允许使用较低浓度的颗粒。0064在研磨环孢菌素A形式2悬浮液之后，将它稀释以获得最终产品。0065治疗方法0066本发明的组合物可以用于治疗任何已知可用本文所述浓度的环孢菌素A如用进行局部治疗的眼睛病状。例如，本发明的组合物可以用于治疗罹患干眼症的患者，用于治疗睑缘炎和睑板腺疾病，用于恢复已经因眼睛屈光手术而受损的角膜敏感性，用于治疗过敏性结膜炎以及特应性和春季角膜结膜炎，以及用于治疗翼状胬肉PTYREGIA、结膜和角膜发炎、角膜结膜炎、移植物抗宿主疾病、移

26、植后青光眼、角膜移植、霉菌性角膜炎、泰格森氏浅层点状角膜炎、葡萄膜炎和西奥多氏上缘角膜结膜炎，以及其它病状。0067国际干眼症研讨会DEWS将干眼症定义为“导致不适、视觉障碍和泪膜不稳定症状的、潜在地损害眼表、伴有泪膜渗透性升高以及眼表发炎的多因素性泪液和眼表疾病”。它包括那些由泪液缺乏或泪液过度蒸发导致的病状，如干燥性角膜结膜炎。0068睑缘炎是一种慢性病症，其在前眼睑和后眼睑边缘引起发炎，累及皮肤和其相关结构毛发和皮脂腺、粘膜皮肤连接和睑板腺。它在晚期还会影响结膜、泪膜和角膜表面并且可能与干眼症相关。通常将睑缘炎分为前睑缘炎或后睑缘炎，前睑缘炎影响眼睑有睫毛的区域，并且后睑缘炎主要影响睑板

27、腺口。0069睑板腺疾病最经常是以以下三种形式之一出现原发性睑板腺炎、继发性睑板腺炎以及睑板腺皮脂溢。睑板腺皮脂溢的特征在于没有发炎而睑板腺分泌过度分泌过多型睑板腺疾病。相比之下，原发性睑板腺炎是以睑板腺分泌停滞并且凝结为特征的阻塞性分泌过多型睑板腺疾病。继发性睑板腺炎是一种局部发炎反应，其中睑板腺是以有斑点的形式从前眼睑边缘的睑缘炎开始继发性发炎。0070在屈光手术如光性屈光性角膜切除术、激光辅助上皮瓣下角膜磨镶术LASEK、EPILASEK、定制的经上皮非接触型消融或切断角膜神经的其它程序之后经常发生角膜敏感性受损。在病毒感染，如由HSV1、HSV2和VZV病毒感染之后也可能发生角膜敏感性

28、受损。角膜敏感性受损的患者经常抱怨他们的眼睛感到干燥，即使泪液产生和蒸发情况可能是正常的也如此，表明这些患者的“干燥”实际上是一种角膜神经病形式，在通过手术切断角膜神经或在病毒感染后发炎时便发生。0071过敏性结膜炎是由对一种或多种过敏原的过敏性引起的结膜发炎。它可能是急性的、间歇性的或慢性的。它随季节发生，即仅在一年中的某些时间发生，或它会常年发生，即整年长期发生。季节性和常年性过敏性结膜炎的症状除结膜发炎以外还包括溢泪、流泪、结膜血管扩张、发痒、乳头状增生、结膜水肿、眼睑水肿以及眼睛有排泄物。在一夜的睡眠之后，排泄物可能在眼睛上方形成结痂。0072特应性角膜结膜炎是一种慢性的严重形式的过敏

29、性结膜炎，它经常导致视觉障碍。症状包括发痒、灼烧、疼痛、发红、异物感、光敏感以及视力模糊。经常会有排泄物，尤其是从一夜的睡眠中醒来之时；排泄物可能为发粘的、粘丝状的以及粘液样的。下结膜经常比说明书CN104080442A108/9页11上结膜更显著地受影响。结膜可能从介于苍白、水肿和没特点至具有晚期疾病的特征包括乳头状肥大、上皮下纤维化、穹窿透视收缩FORMIXFORESHORTENING、倒睫、睑内翻和睫毛脱落MADUROSIS变化。在一些患者中，疾病进展到点状上皮糜烂、角膜新血管形成，以及角膜病的可能损伤视力的其它特征。典型地有结膜中的杯状细胞增殖、上皮假小管形成，以及上皮中脱粒嗜酸性粒细

30、胞和肥大细胞的数目增加的现象。固有质中的CD25T淋巴细胞、巨噬细胞和树突细胞HLADRSUP,HLACD1显著增多。0073如同特应性角膜结膜炎，春季角膜结膜炎是一种严重形式的过敏性结膜炎，但是其倾向于对上结膜的影响比对下结膜的影响更显著。其以两种形式发生。在眼睑形式中，存在正方形的、硬的、平的、密堆积的乳头状突起；在球根缘形式中，角膜周围的结膜变得过度生长和成浅灰色。两种形式经常都伴随有粘液样排泄物。可能发生角膜上皮损失，伴随疼痛和畏光，也可能出现中央角膜斑和特兰塔斯氏点TRANTASDOT。0074实施例0075通过以下实施例进一步说明本发明。0076实施例10077本发明人制备了以下组

31、合物0078表1实施例1中制备的环孢菌素A制剂00790080通过以下工艺制备表1的制剂00811制备浓缩的环孢菌素A纳米悬浮液0082A将环孢菌素A与适当的媒介物混合以形成悬浮液。这种悬浮液中的环孢菌素A浓度处于范围110内。0083B使用高压均质器由马萨诸塞州牛顿市的MICROFLUIDICS制造的或球磨机来研磨环孢菌素A悬浮液以得到D9011JM的纳米悬浮液。0084C用于制备纳米悬浮液浓缩物的媒介物如表1中所列。00852制备最终产品0086A将步骤1中制备的浓缩纳米悬浮液稀释于适用于眼科给药的媒介物中以获得说明书CN104080442A119/9页12具有所需剂量强度的环孢菌素A的最

32、终产品。适用于稀释的媒介物可以含有缓冲剂、稳定剂、胶凝剂和/或稀释液以获得具有所需浓度的CSA的最终制剂。0087B将在稀释纳米悬浮液浓缩物之后制备的纳米悬浮液制剂的组成列于表2中。0088将不同制剂的粒度分布示于图1、2和3中。0089图1示出了与在研磨之前的悬浮液相比的使用高压均质器制备的环孢菌素A形式2纳米悬浮液的粒度分布。0090图2比较了使用不同的表面活性剂和稳定剂制备的环孢菌素A形式2纳米悬浮液的粒度分布。0091图3示出了稀释于含有NACMC的媒介物表2，媒介物A中的制剂的粒度分布。注意，如与纳米悬浮液浓缩物相比，经2周，没见到稀释制剂中有粒度变化。0092图4中示出了环孢菌素A

33、形式3的平均粒度。环孢菌素A形式2形成纳米悬浮液粒度1M，而形式3不形成纳米悬浮液。0093这些实验显示形式2一贯地制得粒度低于CSA的任何其它晶形的纳米悬浮液。形式2纳米悬浮液的较小粒度是优于其它形式的优势；连同其它原因，由于用于溶解的表面积较大并且在眼睛中滞留较长的时间，以及物理稳定性提高，因此期望它显示较高的生物利用率。0094实施例20095本发明人制备了下表2中所列的环孢菌素A纳米悬浮液0096表2实施例2中制备的环孢菌素A制剂00970098本发明人以单次局部剂量将上述制剂施用于NZW雌性兔总共两只兔，每只眼睛一种制剂。结果概述于图5至图13中。它们显示制剂B1递送1/5剂量的环孢

34、菌素A001相对于005，但是保持角膜对005的相当的暴露量以及改善了向球结膜和睑结膜的递送。说明书CN104080442A121/10页13图1图2说明书附图CN104080442A132/10页14图3图4说明书附图CN104080442A143/10页15图5图6说明书附图CN104080442A154/10页16图7图8说明书附图CN104080442A165/10页17图9图10图11说明书附图CN104080442A176/10页18图12图13说明书附图CN104080442A187/10页19图14说明书附图CN104080442A198/10页20图15图16说明书附图CN104080442A209/10页21图17说明书附图CN104080442A2110/10页22图18说明书附图CN104080442A22