一种新的酰胺类化合物.pdf

1、10申请公布号CN104098497A43申请公布日20141015CN104098497A21申请号201410272593722申请日20140617C07D207/273200601A61K31/4015200601A61P25/20200601A61P9/1020060171申请人王庚禹地址510663广东省广州市萝岗区科学城掬泉路3号A60672发明人王庚禹54发明名称一种新的酰胺类化合物57摘要一种新化合物式I所示及其盐，实验证明可以用于治疗和预防脑缺血性疾病、改善睡眠，可以与碱金属钠、镁、钾、钙和有机碱TRIS、二乙胺、三乙胺等生成盐，具有治疗和预防缺血性心脑血管疾病和改善睡眠的

2、作用。51INTCL权利要求书1页说明书12页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书12页10申请公布号CN104098497ACN104098497A1/1页21一种具有预防和治疗脑血管缺血性疾病的化合物，如下图所示2如权利要求1所述的化合物与碱金属反应所生成的盐，自药学上可接受的钠、钾、镁、钙及有机碱氨丁三醇、二乙胺、三乙胺、乙醇胺、乙二胺、二甲胺、羟乙基乙二胺、氨基乙醇胺等。3权利要求12所述化合物在制备治疗脑缺血性疾病药物中的应用。4权利要求12所述化合物在制备改善睡眠药物中的应用。权利要求书CN104098497A1/12页3一种新的酰胺类化合物技术领域

3、0001本发明属于化合物的医药领域，涉及一种新的酰胺类化合物及其盐，并公开其其制备方法和用途。0002背景技术即为广义的脑梗塞，是指突然发生的脑组织局部供血动脉血流灌注减少或血流完全中断，停止供血、供氧、供糖等，使该局部脑组织崩解破坏。缺血性脑卒中的主要原因为动脉粥样硬化所致血栓栓塞；心脏来源的栓子所致脑栓塞；各种原因引起的血管炎、血管损伤以及外伤等。缺血性脑卒中一般在夜间睡眠中发病，常为次晨起床时发现肢体无力或偏瘫，多无意识障碍，血压可正常或偏高，可有动脉硬化史。缺血性脑卒中占脑卒中病人总数的6070，主要包括脑血栓形成和脑栓塞。前者由于脑动脉系统中的粥样硬化和血栓形成使动脉管腔狭窄或闭塞导

4、致脑组织局部动脉血流灌注减少或中止所引起的局部脑组织坏死。缺血性脑卒中的治疗药物第一类是血管扩张药如潘生丁等。过去认为只要药物能使脑血管扩张，便可以使血液从堵塞的血管中多流些过去。却发现扩张血管药非但做不到这一点，还会使病变部位的血液反流到健康的脑组织里去此称为脑内盗血综合征，所以已不主张用此类药。第二类是改善微循环、扩充血容量的药物如低分子右旋糖酐等。目前此类药用得较多，但是有心脏病的病人应慎用，否则可能会引起心力衰竭。第三类是溶解血栓的药物如尿激酶等。应用此类药如果能达到溶解栓子的目的是最为理想的，可是全身静脉用药时往往需要大剂量，有时会造成出血的危险性。现在多向病人推荐使用介入治疗，就是

5、通过导管把药物直接注入梗死的部位来溶解栓子，但采取此治疗方法的前后都要做一次脑血管造影，这本身就又有一定的危险性，何况介入治疗要求病人在得病后6小时内进行，有时往往已错过时机。第四类是抗凝治疗如肝素等。这类药物能防止血液凝固，但使用时要每天查凝血酶原时间和活动度，条件较差的医院无法进行。此外抗凝治疗也有出血的危险性。第五类是使用钙离子拮抗剂如尼莫地平等。这类药物可以防止钙离子从细胞外流入细胞内，起到轻微扩张脑血管，保护脑细胞，增加脑细胞利用氧和葡萄糖等作用。第六类是防止血小板凝聚的药如阿司匹林等。血小板的凝聚往往是脑血栓形成的开端，如果能有效地阻断血小板的凝聚，也许能防止血桂进一步形成。目前这

6、类药物在世界上应用得十分广泛，但与其说是作为治疗药物还不如说是作为预防药物更为恰当，因为脑卒中的急性期使用这类药物效果并不理想。发明内容0003本发明的目的是提供一种用于缺血性脑卒中的新的酰胺类化合物，及其制备方法和用途。0004为了实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案0005说明书CN104098497A2/12页40006通过动物试验证明，安慰剂组没有减小大鼠脑缺血梗塞体积的作用，不能改善脑缺血的症状，也不具备改善睡眠的作用，本发明中化合物则具有很好的改善脑缺血症状的作用，并且能够改善动物的睡眠状态。0007由于式I化合物难溶于水，因此我们使之与碱金属或有机碱成盐，所述的碱指钠、钾、镁

7、、钙及有机碱氨丁三醇、二乙胺、三乙胺、乙醇胺、乙二胺、二甲胺、羟乙基乙二胺、氨基乙醇胺。0008式I所示的化合物与碱金属成盐首选钠盐。0009本发明还提供了用于治疗缺血性脑卒中的药物组合物，其特征是含有治疗有效量的通式1化合物或其盐和药学上可接受的载体。可以是口服制剂或注射制剂。0010实验证明采用实施例1中化合物1制备的注射液，经过溶血、刺激性实验表明，具有良好的耐受性，适宜制备成注射液在临床使用，用于治疗脑卒中患者的脑部细胞坏死和改善患者的睡眠。具体实施例0011实施例1各化合物的制备0012由于本文所述化合物有很强的连贯性，为了详细、准确、方便地描述各化合物制备方法，将其以1个实施例来表

8、达，下述的合成路线各化合物下方表明化合物的序号，为更加简明的阐述，在下面的制备方法中以序号代替001300141、化合物3的合成0015在冰水浴中，将46克的金属钠分批加入到200ML乙醇中，待金属钠完全溶解后，将29克化合物2溶解在40ML乙醇后滴加到上述反应液中，滴加完毕后加热回流4小时。停止反应，冷却反应液至室温，减压蒸馏回收溶剂后，加入500ML饱和氯化铵饱和溶液和150ML蒸馏水，乙酸乙酯萃取100ML3，合并有机层，减压蒸馏除去溶剂后得到162克化合物3，产率为818。HNMR400HZ，DMSO810S，1H，432S，2H，332S，2H；MSM/说明书CN104098497A

9、3/12页5Z1002。2、化合物4的合成0016将1485克化合物3和1755克吡啶溶于150ML的THF中，室温下，将100ML溶有4035克对甲氧基苯甲酰氯的THF溶液缓慢滴加到上述反应液中，30分钟内滴加完毕，然后在室温下继续反应5小时。停止反应，向反应液中加入50ML1N的盐酸溶液和150ML蒸馏水，分出有机层，水层用乙酸乙酯萃取0ML3，合并有机层，减压蒸馏除去溶剂后得到化合物4的粗品，用乙酸乙酯和石油醚重结晶后得到256纯品，产率为731。HNMR400HZ，CDCL3787D，J84HZ，2H，695D，J84HZ，2H，436S，2H，374S，3H，334S，2H；MSM/

10、Z2342。00173、化合物5的合成0018将250克的化合物4溶于100ML的甲醇中，冰水浴下分批少量的加入502克硼氢化钠，10分钟内加完，继续反应2小时。停止反应，加入10ML饱和氯化铵饱和溶液，减压蒸馏除去溶剂甲醇，加入100ML蒸馏水和100ML乙酸乙酯，分出有机层，减压蒸馏除去溶剂后得到239克化合物5，产率95。MSM/Z2362。00194、化合物6的合成0020将235克化合物5，101克三乙胺，120克丁二酸酐和012克DMAP溶于150ML的THF中，在70下反应6小时。停止反应，冷却反应液至室温，加入100ML10N的盐酸溶液和100ML蒸馏水，分出有机层，水层用乙酸

11、乙酯萃取50ML3，合并有机层，用饱和食盐水洗涤50ML3，减压蒸馏除去溶剂得到276克化合物6，产率82。MSM/Z3362。00215、化合物1的合成0022将270克化合物6加入到100ML的蒸馏水中，室温下分批少量加入812可碳酸氢钠，溶液中有气泡冒出，加完后继续反应1小时。停止反应，反应液用乙酸乙酯萃取50ML3，弃去有机层，水层经减压蒸馏浓缩至原来体积的二分之一，缓慢滴加一定体积的丙酮，有沉淀析出，抽滤，干燥后得到212克化合物1，产率为738HNMR400HZ，CD3OD787D，J84HZ，2H，695D，J84HZ，2H，456453M，1H，412410M，2H，373S，

12、3H，272270M，2H，262T，J48HZ，2H，252T，J48HZ，2H；MSM/Z3572。0023实施例2实施例1中化合物1对局部脑缺血大鼠脑梗塞体积的影响00241实验材料和方法0025WISTAR大鼠，体重250280G。手术前后单独饲养，室温保持2325，自有进食和进水。按照LONGA等的方法制备TMCAO模型。大鼠用10水合氯醛麻醉350MG/KG，IP，体温维持在3705，仰卧位固定于手术台上。沿颈正中线切开皮肤，仔细分离右侧颈总动脉CCA，颈外动脉ECA，颈内动脉ICA。将ECA结扎剪断，拉直与ICA成一直线。在ECA上剪一小口，将一根长40CM，直径026MM的圆头

13、硅化尼龙绳用01多聚赖氨酸包被由此开口插入ICA约185200CM，指大鼠大脑前动脉起始处，阻断大脑中动脉的血流供应。缺血2小时后小心抽出尼龙线，结扎ECA开口并缝合手术切口，动物放回笼中再灌24小时。00262实验分组及给药0027大鼠随机分12组模型对照组，注射用水100ML/KG，实施例1中的化合物1给药组25、50、100MG/KG，MCA阻断造成缺血后10分钟时口服给药。说明书CN104098497A4/12页600283脑梗塞体积的测定0029大鼠再灌注损伤24小时后，即刻断头取脑，去除嗅束、小脑和低位脑干，将其冠状切成6片第一至第五片2MM/片，第六片4MM，迅速置于5ML含有1

14、5ML4TTC及01ML1MK2HPO4的溶液中染色37，避光2030分钟，其间每隔5分钟翻动一次。经TTC染色后，正常组织深染呈红色，梗死组织呈白色。将每组脑片排列整齐，拍照保存。求算每片的梗死面积，并最终叠加换算成梗塞体积。梗塞体积以所占大脑半球的百分率来表示，以消除脑水肿的影响。0030脑梗塞体积手术对侧半球体积手术侧半球未梗塞部分的体积/手术对侧半球的体积10000314实验结果0032缺血2小时再灌注24小时后，溶剂对照组的脑梗塞体积为338。假手术组没有任何脑梗塞出现。其他组脑梗塞体积结果如表1所示0033表1灌胃给药对局部缺血大鼠脑梗塞体积的影响00340035与溶剂对照组比，化

15、合物1组口服给药均可以显著缩小脑梗塞体积。0036实施例3实施例1中化合物1对大鼠睡眠作用的影响00371改善睡眠作用试验0038动物来源昆明种小白鼠，1822克，雄性，由广东实验动物中心所提供的清洁级动物。实验动物饲养室温度222，相对湿度5070，动物饲养料，由广东实验动物中心提供。0039本实验设化合物1给药剂量为25MG/KG，另设蒸馏水对照组。0040样品处理各取样品25MG分别加蒸馏水至20ML，使成均匀悬液，供试。0041给样途径灌胃0042实验方法00432戊巴比妥钠阈上剂量催眠试验0044选用体重1822G雄性小鼠40只，随机分为四组，每组10只，连续给样30天，于第30天样

16、品灌胃15分钟后，给各组动物50MG/KGBW的戊巴比妥钠腹腔注射，注射量为02ML/20GBW，以小鼠翻正反射消失达1分钟以上作为入睡判断标准，观察给戊巴比妥钠60分钟内各组动物的入睡时间和睡眠时间。0045结果0046表2样品对动物体重的影响0047说明书CN104098497A5/12页70048由上表可见，样品各剂量组动物体重与对照组相比，均无显著性差异。0049表3阈上剂量的戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响00500051P005与对照组相比经方差分析0052由上表可见，化合物1组样品动物在阈上剂量戊巴比妥钠诱导下的入睡时间和睡眠时间与对照组相比，有显著性差异。00533戊巴比妥钠阈

17、下剂量催眠试验0054选用体重1822G雄性小鼠40只，随机分为四组，每组10只，连续给样28天，于第28天样品灌胃15分钟后，给各组动物30MG/KGBW的戊巴比妥钠腹腔注射，注射量为02ML/20GBW，以小鼠翻正反射消失达1分钟以上作为入睡判断标准观察给戊巴比妥钠25分钟内各组动物发生睡眠的动物数。0055结果0056表4阈下剂量的戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率的影响00570058P005与对照组相比经卡方检验0059由上表可见，化合物1组和对照组在阈下剂量戊巴比妥钠诱导下的入睡动物和睡眠发生率与对照组相比，均有显著性差。0060总结经口给予小鼠样品30天后，化合物1组具有改善睡眠的作用

18、。0061实施例4采用实施例1中化合物1制备的注射液0062说明书CN104098497A6/12页80063按处方量准确称取实施例1制备的化合物1置一容器中，加适量注射用水，搅拌至全溶，并调节PH至8588，加注射用水至4000ML，加入2G针用活性炭，煮沸15MIN，抽滤脱碳，溶液经022M微孔滤膜过滤，溶液灌封于玻璃安瓿内每支含化合物194MG制剂经115加压灭菌30MIN即可。0064实施例5实施例4中注射液溶血性及刺激性试验0065液溶血性试验0066体外溶血试验向盛有2红血球混悬液的各支药液管中分别加入不等量的实施例4制备的注射液的低浓度和高浓度063MG/ML和188MG/ML，

19、各支药液管在3小时内不产生溶血作用。说明实施例4制备的注射液体外溶血性试验阴性。具体的实验方法和实验结果如下00671、受试药物的配制00681高剂量组取实施例4制备的注射液4ML94MG/瓶1瓶，吸出05ML后用0909G/100ML氯化钠注射液稀释至625ML，使成浓度为188MG/ML的溶液。00692低剂量组取上述浓度为188MG/ML的溶液2ML，用0909G/100ML氯化钠注射液稀释至6ML，稀释成浓度为063MG/ML的溶液。00702、给药方法007112红血球混悬液的制备0072取兔血数毫升，放入盛有含玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。然后分装在数

20、支离心管中，每管加约10倍量的09氯化钠注射液，摇匀，离心1500转/分，15分钟，除去上清液，沉淀的红血球再用09氯化钠注射液洗涤23次，直至上清液不显红色为止。将所得红血球用09氯化钠注射液配成2的混悬液，供试验用。0073取口径大小均匀的洁净试管7只每管均设平行管，编号后，用移液管按表9所示配比量依次加入2红血球混悬液、09氯化钠注射液、注射用水和受试药液，混匀后立即置37恒温箱中进行温育，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时。0074表52红血球混悬液的制备编号0075说明书CN104098497A7/12页90076注其中15管为供试品管，第6管为阴性

21、对照管，第7管为阳性对照管。00772结果观察0078如试验中溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，即表示有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，需进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将聚集物放在载波片上，在盖玻片边缘滴加2滴09氯化钠注射液，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚；若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。00793、结果判定0080当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在3小

22、时内不产生溶血和凝聚，则受试物可以注射使用；若受试物管中的溶液在3小时内产生溶血和或凝聚，则受试物不宜注射使用。00814、试验结果0082分别加入低浓度为063MG/ML和高浓度为188MG/ML的注射液溶液的各支药液管在3小时内均不产生溶血作用，体外溶血性试验阴性。详见下表6和表7。0083表6注射液高剂量组溶血性试验结果肉眼观察0084说明书CN104098497A8/12页100085注“”表示全溶血，“”表示不溶血；第6管为阴性对照管，第7管为阳性对照管。0086表7注射液低剂量组溶血性试验结果肉眼观察0087说明书CN104098497A109/12页110088注“”表示全溶血，

23、“”表示不溶血；第6管为阴性对照管，第7管为阳性对照管。0089注射液血管刺激性试验0090兔血管刺激性试验试验选用健康新西兰兔8只，采用同体左右侧耳朵自身对比法，左侧耳缘静脉注射受试药物，给药体积5ML/KG体重，各给药组给予相应剂量的实施例4制备的注射液，低剂量组和高剂量组剂量分别是315MG/KGBW和94MG/KGBW，按浓度计算其低浓度和高浓度分别为063MG/ML和188MG/ML，是临床一次静脉滴注拟用浓度的0714倍和24倍，右耳给予等体积0909G/100ML氯化钠注射液作对照，每天一次，连续3天。8只兔依次给予受试药的高浓度和低浓度后，再分别给予09氯化钠注射液。各取低剂量

24、和高剂量的2只兔于末次给药后48小时剖检，余下低浓度和高浓度的4只兔在末次给药2周恢复期结束后剖检。结果8只动物双耳血管轮廓较清晰，兔耳厚薄均匀，未见明显改变；病理组织学检查，动物双耳血管未见有毒理学意义的改变。说明实施例4制备的注射液血管刺激性试验符合规定。具体的实验方法和实验结果如下00911、受试物的配制00921高剂量组取实施例4制备的注射液4ML94MG/瓶2瓶，吸出8ML后用0909G/100ML氯化钠注射液稀释至1000ML，使成浓度为188MG/ML的溶液。00932低剂量组取上述浓度为188MG/ML的溶液30ML，用09氯化钠注射液稀释至900ML，稀释成浓度为063MG/

25、ML的溶液。00942、动物称重给药前及末次给药后48小时和14天各称重一次。说明书CN104098497A1110/12页1200953、一般观察与动物取材0096每天给药前观察并记录动物和血管注射部位的反应，末次给药后48小时，分别放血处死受试药物的高浓度和低浓度的2只新西兰兔，肉眼观察并记录血管组织的反应后，从耳根部剪下双兔耳先剪左耳，后剪右耳，并标记，然后分别剪取一段兔耳标本固定在10中性甲醛溶液中标本长约8CM，宽约1CM；远心端切口距第一针眼约05CM处，近心端切口距第三针眼约2CM处，挂线端为近心端。各留下受试药物的高浓度和低浓度2只动物继续观察至末次给药后14天，进行如下病理检

26、查以第一针眼为界，远端切一段；以第三针眼为界，近端切二段；制片时血管横切，常规石蜡制片，切片厚度约45M，HE染色，然后进行病理组织学检查。00974、结果判定0098根据肉眼观察和病理检查的结果进行综合判断。00995、试验结果010051肉眼观察0101每天给药前肉眼观察并记录动物血管注射部位的反应，给药期间肉眼可见受试药物高浓度和低浓度的部分动物给药侧和对照侧兔耳进针部位血管表皮内外侧呈红色，面积由01CM02CM至02CM10CM。在末次给药后48小时，受试药物的高浓度和低浓度的4只兔的双侧兔耳血管轮廓较清晰，兔耳厚薄均匀，未见明显改变，详见表12和表13。末次给药后14天剖检受试药物

27、的高浓度和低浓度的4只兔，双侧兔耳血管轮廓较清晰，兔耳厚薄均匀，未见明显改变。010252病理检查0103受试药物的高浓度和低浓度的4只兔于末次给药后48小时剖检，余下受试药物的高浓度和低浓度的4只兔在2周恢复期结束后剖检。病理组织学检查均未见血管组织有变性或坏死等显著刺激性反应。结果见表8和表90104表8注射液高剂量组对兔耳血管刺激反应末次给药后48小时肉眼观察结果0105说明书CN104098497A1211/12页130106表9注射液低剂量组对兔耳血管刺激反应末次给药后48小时肉眼观察结果0107说明书CN104098497A1312/12页140108以上结果说明采用实施例1中的化合物1制备的注射液经过溶血性和血管刺激性试验表明具有良好的安全性，适宜制备成注射液在临床使用。说明书CN104098497A14