一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法.pdf

1、10申请公布号CN104086613A43申请公布日20141008CN104086613A21申请号201410346568922申请日20140721C07J9/0020060171申请人西安天丰生物科技有限公司地址710075陕西省西安市高新区唐延南路11号都会41019室72发明人杨海鹰王晓龙74专利代理机构西安西达专利代理有限责任公司61202代理人刘华54发明名称一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法57摘要本发明公开了一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法。该方法步骤提取过程甜瓜藤份，乙醇浸泡回流提取，提取液过滤浓缩成浸膏；催化反应浸膏加入浓盐酸，再加入六水合三氯化铁

2、搅拌反应，冷却到室温过滤，水淋洗，干燥；精制过程粗品用醋酸乙脂搅拌溶解，再加入活性炭，脱色，浓缩到小体积，放置过夜结晶；重结晶过程类精品用乙醇溶解趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶，过滤；将精品放置于真空干燥箱中干燥8小时，即得葫芦素B精品。原料来源广泛，生产成本低，降低了酸性环境对葫芦素B的破坏，产品率达60以上，纯度在990以上，废水BOD在100以下，适合工业化生产循环用水，广泛用于植物提取行业。51INTCL权利要求书1页说明书6页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图2页10申请公布号CN104086613ACN104086613A1/1

3、页21一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法，该方法按下述步骤进行A、提取过程按质量比，将晒干的甜瓜藤份粉碎，按体积比用倍量的乙醇浸泡1320小时，回流提取3次，乙醇提取液过滤浓缩到比重为10510的浸膏；B、催化反应过程给A步骤得到质量比的浸膏加入17倍量的浓盐酸，再加入00005倍量的六水合三氯化铁作为催化剂，在温度0搅拌反应30分钟，冷却到室温过滤，水淋洗到H46之间，干燥；C、精制过程按质量比，将B步骤得到干燥所得的粗品，用585倍量醋酸乙脂搅拌溶解，再加入05倍量的活性碳，用温度6脱色1小时，趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶；D、重结晶过程将C步骤获得的类精品，用585倍量乙

4、醇溶解趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶，过滤；E、干燥过程将D步骤得到的精品，放置于真空干燥箱中，干燥8小时，即得葫芦素B精品。2根据权利要求1所述的一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法，其特征在于该方法按下述步骤进行A、提取过程按质量比，将晒干的甜瓜藤份粉碎，按体积比用565倍量的乙醇浸泡1518小时，回流提取3次，乙醇提取液过滤浓缩到比重为10510的浸膏；B、催化反应过程给A步骤得到质量比的浸膏加入416倍量的浓盐酸，再加入00005倍量的六水合三氯化铁作为催化剂，在温度0搅拌反应30分钟，冷却到室温过滤，水淋洗到H46之间，干燥；C、精制过程按质量比，将B步骤得到干燥所得的粗

5、品，用782倍量醋酸乙脂搅拌溶解，再加入073倍量的活性碳，用温度6脱色1小时，趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶；D、重结晶过程将C步骤获得的类精品，用783倍量乙醇溶解趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶，过滤；E、干燥过程将D步骤得到的精品，放置于真空干燥箱中，干燥8小时，即得葫芦素B精品。权利要求书CN104086613A1/6页3一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法技术领域0001本发明涉及一种催化反应分离葫芦素B的方法，具体涉次及一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法。背景技术0002葫芦素B是一种治疗用于急性和迁延性慢性肝炎、原发性肝癌的新型原料药，广泛的应用于药品、

6、化妆品和保健品等各个领域。0003根据文献报道，葫芦素B在甜瓜蒂中的含量最高，可以达0608，但甜瓜蒂作为原料进行使用，其高昂的成本及原料的局限性导致了该产品存在价格的居高不下，和产品供应的数量有限性等缺陷。0004葫芦素B因为期货市场的特新性以及国内外厂家对工艺路线的严格保密性，所以已经申请的专利并不多。0005由南京泽朗农业发展有限公司于年月日申请的中国专利（201010235780X）公开了“一种提取葫芦素的方法”，该方法的权利要求保护的范围包括如下步骤1一种提取葫芦素B的方法，其特征在于包含以下步骤把甜瓜蒂原料粉碎用PH35的酸性水拌湿，加入生物酶混匀3040酶解24天，酶解原料再投入

7、提取容器，加515倍量乙醇回流提取23次，提取液加入活性炭氧化铝混合短柱，下注液减压回收乙醇至醇浓度3050，放置结晶，滤出得粗结晶，粗结晶加入氯仿冷溶，滤过回收氯仿至1/31/6体积，放置结晶，得二次结晶物，将二次结晶物，乙醇回流溶解，再加入活性炭脱色，滤过放置结晶，干燥结晶物即得产品葫芦素B。0006由浙江工业大学于年月日申请的中国专利（2009101548370）公开了一种葫芦素B的提取分离方法，该方法包括如下步骤1、将原料甜瓜蒂粉碎，用乙醇渗漉或者乙醇回流提取，提取液浓缩以后，用乙酸乙酯萃取三次以上，回收乙酸乙酯，即得总葫芦素提取物；2、取总葫芦素提取物溶于体积分数2545的乙醇水溶液

8、中，在醋酸存在下进行水解反应，充分反应后调节PH值至中性，浓缩至干；所述醋酸的浓度为0103MOL/L；3、步骤2）所得浓缩物经纯化处理得到葫芦素B含量在60以上的葫芦素B产品；所述的纯化处理采用如下方法所得浓缩物用体积分数2545的乙醇水溶液溶解，再通过大孔树脂柱层析，以体积分数5060的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩得到葫芦素B含量在60以上的葫芦素B产品。0007上述方法虽然可以获得高含量的葫芦素B产品，但存在工艺设计过程中原料来源比较局限，酶解的温度及酶解时间长等缺陷。00081原料来源问题根据数据测算，1亩地的甜瓜可的约35公斤干的甜瓜蒂，2014年亳州市场上甜瓜蒂统货的价格是80

9、0元/公斤。并且没有办法提供吨级的原料。说明书CN104086613A2/6页400092酶解的温度问题酶解其实是个发酵过程，受气温的影响非常大，冬天和夏天有着巨大的差异，作为一个产品的生产季节的变化会导致产品供货时间的周期性变化，这对一个工业产品来说非常的不可取。00103遵照该专利的技术信息，24天的酶解时间，大大的浪费了人力和物力的成本，并且大规模的发酵池和场地有着诸多的安全隐患并且不环保。0011由此可见，该提取分离方法原料来源受限制，季节影响明显，生产周期长，不易实现工业化。0012该方法提取过程中通过结构转化将葫芦素的结构类似物（如葫芦素葡萄糖苷）转化为葫芦素，提高了葫芦素的提取率

10、，生产工艺简单，操作简便。0013该方法的最大问题是简单的利用常规的酸水解转化方法，只转化了部分的葫芦素B2葡萄糖甙，长时间的酸性环境，会导致葫芦素B的破坏，转化的收率低，原料浪费明显。发明内容0014本发明的目的是提供一种生产过程不受季节及温度影响，反应时间短，能耗低，生产成本低的一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法。0015为了克服现有技术的不足，本发明的技术方案是这样解决的一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法，该方法按下述步骤进行A、提取过程按质量比，将晒干的甜瓜藤份粉碎，按体积比用倍量的乙醇浸泡1520小时，回流提取3次，乙醇提取液过滤浓缩到比重为10510的浸膏；B、

11、催化反应过程给A步骤得到质量比的浸膏加入17倍量的浓盐酸，再加入00005倍量的六水合三氯化铁作为催化剂，在温度0搅拌反应30分钟，冷却到室温过滤，水淋洗到H46之间，干燥；C、精制过程按质量比，将B步骤得到干燥所得的粗品，用585倍量醋酸乙脂搅拌溶解，再加入05倍量的活性碳，用温度6脱色1小时，趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶；D、重结晶过程将C步骤获得的类精品，用585倍量乙醇溶解趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶，过滤；E、干燥过程将D步骤得到的精品，放置于真空干燥箱中，干燥8小时，即得葫芦素B精品。0016所述的一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法，该方法按下述步骤进行A、提

12、取过程按质量比，将晒干的甜瓜藤份粉碎，按体积比用565倍量的乙醇浸泡1518小时，回流提取3次，乙醇提取液过滤浓缩到比重为10510的浸膏；B、催化反应过程说明书CN104086613A3/6页5给A步骤得到质量比的浸膏加入416倍量的浓盐酸，再加入00005倍量的六水合三氯化铁作为催化剂，在温度0搅拌反应30分钟，冷却到室温过滤，水淋洗到H46之间，干燥；C、精制过程按质量比，将B步骤得到干燥所得的粗品，用782倍量醋酸乙脂搅拌溶解，再加入073倍量的活性碳，用温度6脱色1小时，趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶；D、重结晶过程将C步骤获得的类精品，用783倍量乙醇溶解趁热过滤浓缩到小体积，

13、放置过夜结晶，过滤；E、干燥过程将D步骤得到的精品，放置于真空干燥箱中，干燥8小时，即得葫芦素B精品。0017本发明与现有技术相比，具有以下优点、本发明使用原料来源广泛的甜瓜藤，生产成本低，保证了生物资源的最大利用，增加了瓜农的收入。0018、催化转化反应使得葫芦素糖甙类物质迅速转化为葫芦素B，降低了酸性环境对葫芦素B的破坏，大大增加了目标产品的得率。0019、生产过程不受季节及温度影响，反应时间短，大大降低了生产的能耗，节约了生产成本。0020、没有硅胶或氧化铝层析过程，操作简单，节约溶剂大大降低了生产成本。0021、该方法的产品提高率达60以上，高于常规水解产率的710的水平，产品纯度在9

14、90以上，最高可达999，各类溶剂得回收率可达92以上，废水BOD在100以下，适合工业化生产循环用水，广泛用于植物提取行业。附图说明0022图1为传统工艺流程图；图2为本发明的工艺流程图。具体实施方式0023下面结合附图和实施例对本发明内容做进一步详细叙述参照图所示，一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法，该方法按下述步骤进行A、提取过程按质量比，将晒干的甜瓜藤份粉碎，按体积比用倍量的乙醇浸泡1520小说明书CN104086613A4/6页6时，回流提取3次，乙醇提取液过滤浓缩到比重为10510的浸膏；B、催化反应过程给A步骤得到质量比的浸膏加入17倍量的浓盐酸，再加入00005倍量的

15、六水合三氯化铁作为催化剂，在温度0搅拌反应30分钟，冷却到室温过滤，水淋洗到H46之间，干燥；C、精制过程按质量比，将B步骤得到干燥所得的粗品，用585倍量醋酸乙脂搅拌溶解，再加入05倍量的活性碳，用温度6脱色1小时，趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶；D、重结晶过程将C步骤获得的类精品，用585倍量乙醇溶解趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶，过滤，所述小体积是指浓缩后的体积；E、干燥过程将D步骤得到的精品，放置于真空干燥箱中，干燥8小时，即得葫芦素B精品。0024所述的一种从甜瓜藤中通过催化反应分离葫芦素B的方法，该方法按下述步骤进行A、提取过程按质量比，将晒干的甜瓜藤份粉碎，按体积比用56

16、5倍量的乙醇浸泡1518小时，回流提取3次，乙醇提取液过滤浓缩到比重为10510的浸膏；B、催化反应过程给A步骤得到质量比的浸膏加入416倍量的浓盐酸，再加入00005倍量的六水合三氯化铁作为催化剂，在温度0搅拌反应30分钟，冷却到室温过滤，水淋洗到H46之间，干燥；C、精制过程按质量比，将B步骤得到干燥所得的粗品，用782倍量醋酸乙脂搅拌溶解，再加入073倍量的活性碳，用温度6脱色1小时，趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶；D、重结晶过程将C步骤获得的类精品，用783倍量乙醇溶解趁热过滤浓缩到小体积，放置过夜结晶，过滤；E、干燥过程将D步骤得到的精品，放置于真空干燥箱中，干燥8小时，即得葫芦

17、素B精品。0025提取溶剂的选择目前广泛用于工业上的提取溶剂主要为甲醇、乙醇，比较低廉无疑是甲醇、乙醇，因为甲醇对眼睛有较强的伤害作用和考虑最终产品的溶剂残留，故选乙醇做为提取溶剂就成为首选。0026催化反应条件的确定作为催化剂用途的铬、铂、钯、铁等金属和他们的化合物都可以作为催化剂，考虑到环保因素以及成本的因素，申请人首先将催化反应的物质确定在铁及其化合物的范围内。说明书CN104086613A5/6页70027申请人先后使用了铁粉、三氧化二铁、氯化铁，通过实验申请人发现铁粉已经三氧化二铁加入后效果不是非常明显，通过实验分析，申请人知道以上2种物质在遇到盐酸后首先会发生反应释放出氢气和水。这

18、大大降低了该物质作为催化剂的效果。0028氯化铁加入后，遇水的瞬间产生大量热量，反应非常剧烈，经过实验分析，该热量的产生是因为氯化铁与水亲和，释放出大量热能导致的结果。考虑到生产的安全性，申请人终止了氯化铁的使用。改成他的水合物六水合三氯化铁。0029六水合三氯化铁加入后，反应平稳，申请人对反应时间和催化剂加入的数量经过多次实验，并绘制曲线，获得了浸膏重量015倍量的酸的比例，以及浸膏重量003倍量六水合三氯化铁的催化剂的最佳比例。0030成品的规格要求样品经HPLC检测，葫芦素B含量不低于980；熔点220225；干燥失重不高于20；水份含量不高于1；有机溶剂含量不高于05。0031综上所述

19、，申请人“西安天丰生物科技有限公司”通过对原料的全方位分析，发现甜瓜藤中含有01502的葫芦素B，同时含有0203的葫芦B2葡萄糖甙,02504左右的CC键结合的类糖甙类葫芦素B物质,葫芦素B2葡萄糖甙可以通过水解的方法转化为葫芦素B，但水解的同时一部分水解的葫芦素B被破坏掉，2小时的时间将到达产生和破坏的平衡，导致只能提高710的收率。同时CC键结合的类糖甙类葫芦素B物质因为结构的特殊性，对常规的反应条件将无法使其转化为葫芦素B,西安天丰生物科技有限公司通过技术研发建立了一种催化反应从甜瓜藤中分离葫芦素B的方法葫芦素B2葡萄糖甙在催化的条件下，最短的时间内实现最大范围的转化的同时也将CC键结

20、合的类糖甙类葫芦素B物质继续转化为葫芦素B,大大的提高了葫芦素的得率。具有成本低、效率高、易操作的特点。0032实施例申请人对陕西主要甜瓜产地阎良的准备丢弃的甜瓜藤随即抽样，获取了27吨原料，晒干粉碎后，共获得870公斤干品甜瓜藤原料，并对这批原料采用不同投料量的生产加工。0033实施例1取原料15公斤，加入9升的乙醇，20L的广口瓶加热提取三次，每次1小时，浓缩得到163克浸膏，检测葫芦素B浓度为184毫克/克,163克浸膏,加入2445克浓盐酸,再加入489克六水合三氯化铁,反应30分钟,水洗后H为46，获得78克粗品,检测葫芦素B含量为615毫克/克，葫芦素B的收率增加为5994,并按照

21、发明工艺进行结晶、抽滤。得产品353克，含量检测为9833。0034实施例2取原料15公斤，加入90升的乙醇，200L的提取罐中加热提取三次，每次1小时，浓缩得到1576克浸膏，检测葫芦素B浓度为1795毫克/克,1576克浸膏,加入2364克浓盐酸,再加入4728克六水合三氯化铁,反应30分钟,水洗H46获得791克粗品,检测葫芦素B含量为5683毫克/克，葫芦素B的收率增加为589,并按照发明工艺进行结晶、抽滤。得产品367克。0035含量检测为9913。0036实施例3说明书CN104086613A6/6页8取原料50公斤，加入300升的乙醇，500L的提取罐中加热提取三次，每次1小时，浓缩得到4961克浸膏，检测葫芦素B浓度为1764毫克/克,4961克浸膏,加入74415克浓盐酸,再加入14883克六水合三氯化铁,反应30分钟,水洗H46获得2473克粗品,检测葫芦素B含量为5572毫克/克，葫芦素B的收率增加为5746,并按照发明工艺进行结晶、抽滤。得产品1217克，含量检测为9881。说明书CN104086613A1/2页9图1说明书附图CN104086613A2/2页10图2说明书附图CN104086613A10