可载药壳聚糖微球的制备.pdf

1、10申请公布号CN102350278A43申请公布日20120215CN102350278ACN102350278A21申请号201110168817622申请日20110617B01J13/02200601A61K47/36200601A61K9/1620060171申请人北京化工大学常州先进材料研究院地址213164江苏省常州市常武中路801号常州科教城B座252572发明人聂俊朱晓丹马贵平徐娟54发明名称可载药壳聚糖微球的制备57摘要本发明涉及可用作药物载体的壳聚糖微球的制备。本发明采用自组装法制备壳聚糖微球。首先用10溴癸酸甲酯对羟甲香豆素进行改性，制备含有羧基的羟甲香豆素，接着将其加

2、入壳聚糖的乙酸溶液进行反应，用NAOH调节反应体系的PH为79，在丙酮中沉淀出产品。取2030MG的产品溶于50ML的PH为69的PBS缓冲液中，用探针式超声均化仪均化，过滤膜过滤，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。本方法制备工艺简单，成本较低，且制备的纳米粒子无细胞毒性，可用作药物载体。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图1页CN102350281A1/1页21可载药壳聚糖微球的制备，其特征在于包括以下步骤1按摩尔比为111称取一定量的10溴癸酸甲酯，羟甲香豆素和碳酸钾，将其溶于25ML丙酮中，4070下

3、搅拌反应510H。2将步骤1中所得产物与5NAOH反应，再用HCL酸化至PH为3545，反复用水洗。3按摩尔比为1112称取一定量的壳聚糖和上述产物，将产物溶于乙醇中，加入EDC和NHS活化羧基05H2H后，慢慢滴加至12W/V乙酸的壳聚糖水溶液中，室温下避光反应12天。4用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为79，于丙酮中沉淀出产品。5取2030MG的产品溶于50MLPH为69的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。2如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1中的10溴癸

4、酸甲酯，羟甲香豆素和碳酸钾的摩尔比为111。3如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1中，反应温度为4070。4如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2中HCL酸化至PH为3545。5如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3中，壳聚糖与改性后羟甲香豆素的摩尔比为1112。6如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3中壳聚糖与EDC、NHS的摩尔比为11212122。7如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4中调反应体系的PH值为79。8如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤5中产品的质量为2030MG。9如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤5中PBS缓冲液的PH值为

5、69。权利要求书CN102350278ACN102350281A1/4页3可载药壳聚糖微球的制备技术领域0001本发明涉及可载药壳聚糖微球的制备背景技术0002甲壳素是地球上储量仅次于纤维素的天然的可再生资源，壳聚糖是其N乙酰基脱去55以上而得到的一种碱性多糖。由于壳聚糖具有良好的生物相容性、生物可降解性、抗菌性、防腐性以及止血和促进伤口愈合等诸多特性，因此壳聚糖在伤口敷料、药物控释系统和组织工程等方面有着良好的应用前景。0003壳聚糖微球由高分子材料形成的外壳和水或油状内核构成，而药物通常就被聚合物膜包封在此内核层。理想的微球载体可生物降解并且无毒，所具有的特异靶向性使药物被定向释放出来，载

6、体则被生物降解，避免转运过程中药物在其它组织释放而产生副作用或过早被灭活。由于壳聚糖具有可被体内多种酶生物降解，降解产物无毒且能被生物体完全吸收等优良特性，是药物缓释的理想载体，因此其作为药物载体材料的研究受到了极大的重视。0004制备壳聚糖微球的方法主要有乳化交联法、离子凝胶化法、分子自组装法等。有文献报道以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，以SPAN80为乳化剂，环己烷为油相，通过乳化交联法制备出分散性及圆整度良好的5氟尿嘧啶壳聚糖微球。还有文献采取离子交联法利用壳聚糖的游离氨基与多聚磷酸钠阴离子发生分子间或分子内交联反应，制备平均直径为100纳米左右的壳聚糖球状凝胶。0005乳化交联法制备的

7、纳米粒子粒径较小、球形度好，用作药物载体药物释放周期较长，但此方法常用戊二醛作交联剂，戊二醛具有抗基因毒性，而且蛋白质或多肽也与戊二醛反应，因此这种制备方法对于蛋白类和肽类药物方面的应用很受限制。离子交联法的机理主要是壳聚糖与带负电荷的聚阴离子电解质通过聚电解质大分子的分子内和分子间的静电相互作用而交联形成纳米粒子，这种反应条件温和，易于得到均一粒径的纳米粒且粒径的范围可调整，但由于较弱的离子键作用，使得形成的粒子骨架密度低，用作药物载体的药物主要分布在粒子的表面，药物突释效应严重。0006分子自组装是指在一定条件下，通过非化学键的相互作用，分子间自发组合，形成一类具有明确、稳定结构的且有某种

8、特定性能的分子聚集体。分子自组装法在制备过程中不需要添加乳化剂、表面活性剂等有机溶剂，可减少载体的毒性；此外该方法工艺简单、成本低，是环境友好型的绿色方法，具有很好的产品开发前景。发明内容0007针对离子交联法和乳化交联法的限制，本发明的目的在于用自组装法制备可载药壳聚糖微球0008本发明的原理及方法本发明以壳聚糖为基体，向壳聚糖链引入疏水性基团，加上壳聚糖链本身具有亲水基团，采用自组装法制备壳聚糖微球。说明书CN102350278ACN102350281A2/4页40009制备本发明所述的壳聚糖微球的方法包括如下步骤00101称取一定量的10溴癸酸甲酯，羟甲香豆素和碳酸钾，将其溶于丙酮中，4

9、070下搅拌反应510H。00112将步骤1中所得产物与5NAOH反应，再用HCL酸化，反复用水洗。00123称取一定量的上述产物，溶于乙醇中，加入EDC和NHS活化羧基05H2H后，慢慢滴加至溶于2乙酸的壳聚糖水溶液中，CSEDCNHS11212122，室温下避光反应。00134用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为79，于丙酮中沉淀出产品。00145取2030MG的产品溶于50MLPH为69的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0015本发明的优点00161本发明提供的

10、制备方法中，不需要加任何交联剂，避免了交联剂潜在的细胞毒性。00172本发明提供的制备方法工艺简单，成本较低。附图说明0018图1为可载药壳聚糖微球的扫描电镜图0019具体实施方式0020实施例10021称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，40下搅拌反应5H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为35，反复用水洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入018GEDC和011GNHS，磁力搅拌05H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于2的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应24H。用1MOL/L的NAOH溶

11、液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取20MG的产品溶于50MLPH为6的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0022实施例20023称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，40下搅拌反应10H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为45，反复用水洗。称取上述产物066G，溶于乙醇中，加入03GEDC和018GNHS，磁力搅拌2H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于2的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中

12、。室温下避光反应48H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取20MG的产品溶于50MLPH为6的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0024实施例30025称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，40说明书CN102350278ACN102350281A3/4页5下搅拌反应5H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为35，反复用水洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入018G

13、EDC和011GNHS，磁力搅拌05H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于1的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应24H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为9，于丙酮中沉淀出产品。取30MG的产品溶于50MLPH为9的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0026实施例40027称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，50下搅拌反应5H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为4，反复用水

14、洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入03GEDC和018GNHS，磁力搅拌05H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于2的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应24H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取20MG的产品溶于50MLPH为8的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0028实施例50029称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，50下搅拌反应5H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NA

15、OH反应，用HCL酸化至体系PH值为4，反复用水洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入03GEDC和018GNHS，磁力搅拌05H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于2的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应24H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取20MG的产品溶于50MLPH为9的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0030实施例60031称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，50下

16、搅拌反应5H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为4，反复用水洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入03GEDC和018GNHS，磁力搅拌05H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于2的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应24H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取30MG的产品溶于50MLPH为9的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0032实施例70033称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟

17、甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，60下搅拌反应5H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为45，反复用水洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入03GEDC和018GNHS，磁力搅拌1H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于1的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。说明书CN102350278ACN102350281A4/4页6室温下避光反应48H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取30MG的产品溶于50MLPH为9的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行

18、冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0034实施例80035称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，60下搅拌反应8H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为4，反复用水洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入03GEDC和018GNHS，磁力搅拌1H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于1的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应48H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取30MG的产品溶于50MLPH为9的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化

19、，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0036实施例90037称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，60下搅拌反应8H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为4，反复用水洗。称取上述产物033G，溶于乙醇中，加入03GEDC和018GNHS，磁力搅拌1H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于1的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应48H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为8，于丙酮中沉淀出产品。取30MG的产品溶于50MLPH为7的P

20、BS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0038实施例100039称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，70下搅拌反应9H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为4，反复用水洗。称取上述产物066G，溶于乙醇中，加入018GEDC和011GNHS，磁力搅拌2H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于2的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应48H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为8，于丙酮中沉

21、淀出产品。取20MG的产品溶于50MLPH为6的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。0040实施例110041称取15G的10溴癸酸甲酯，1G羟甲香豆素，和08G碳酸钾于25ML丙酮中，70下搅拌反应9H。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5NAOH反应，用HCL酸化至体系PH值为4，反复用水洗。称取上述产物066G，溶于乙醇中，加入018GEDC和011GNHS，磁力搅拌2H，活化羧基。称取壳聚糖013G溶于2的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应48H。用1MOL/L的NAOH溶液调反应体系的PH值为8，于丙酮中沉淀出产品。取25MG的产品溶于50MLPH为8的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。说明书CN102350278ACN102350281A1/1页7图1说明书附图CN102350278A