一种香豆素的制备方法.pdf

1、10申请公布号CN102060824A43申请公布日20110518CN102060824ACN102060824A21申请号200910228565422申请日20091113C07D311/18200601A61P7/0220060171申请人天津金世制药有限公司地址300385天津市西青区外环线17号桥天津金世制药有限公司72发明人宋富智54发明名称一种香豆素的制备方法57摘要本发明公开了一种提取香豆素的制备方法。它是称取香豆素粉碎，加入312倍重量份数的水，回流提取23次，在料液比140，提取温度4095，提取3060MIN/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质，然后取提取液减压蒸馏浓缩，

2、浓缩液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80，静置，过滤，收集沉淀。香豆素具有保肝降谷丙转氨酶、增强免疫、镇静、降血糖及抗肿瘤等作用，被广泛应用于中成药、保健食品、美容药膳，具有较好的开发前景。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页CN102060829A1/1页21一种香豆素的制备方法，其特征在于，以如下的方法制备1称取香豆素粉碎，加入312倍重量份数的水，回流提取23次，在料液比140，提取温度4095，提取3060MIN/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；2取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80，静置，过滤，收集沉淀。2

3、如权利要求1所述的制备方法，其中提取温度为40。3如权利要求1所述的制备方法，其中提取时间为30MIN/次。4如权利要求1所述的制备方法，其中加入95乙醇。权利要求书CN102060824ACN102060829A1/4页3一种香豆素的制备方法技术领域0001本发明属于中药制药技术领域，涉及香豆素的制备方法。背景技术0002香豆素类药物是一类口服抗凝药物。它们的共同结构是4羟基香豆素。同时，双香豆素还可以用于对付鼠害。当初人们在牧场牲畜因抗凝作用导致内出血致死的过程中发现的双香豆素，意识到了这一类物质的抗凝作用，引起了之后对香豆素类药物的研究和合成，从而为医学界提供了多一种重要的凝血药物。常见

4、的香豆素类药物有双香豆素DICOUMAROL、华法林WARFARIN，苄丙酮香豆素和醋硝香豆素ACENOCOUMAROL，新抗凝。0003香豆素类药物的作用是抑制凝血因子在肝脏的合成。香豆素类药物与维他命K的结构相似。香豆素类药物在肝脏与维他命K环氧化物还原酶结合，抑制维生素K由环氧化物向氢醌型转化，维生素K的循环被抑制。可以说香豆素类药物是维生素K拮抗剂，或者是竞争性抑制剂参见酶。含有谷氨酸残基的凝血因子II、VII、IX、X的羧化作用被抑制，而其前体是没有凝血活性的，因此凝血过程受到抑制。但它对已形成的凝血因子无效。表现在1在体内具抗癌活性，并能促进人体的免疫功能；所含香豆素对肉瘤S180

5、的抑制效率可达9688。2浸剂对正常兔作腹腔注射有利尿作用；乙醚或乙醇提取物能使离体蛙心收缩加强，对家兔血糖则先使升高而后降低。3茯神煎剂对小鼠有镇静作用，茯苓的镇静作用次于茯神。药性甘、淡、平、归肺、胃、肾经。败毒抗癌、利水化饮、健脾宁心。利水渗湿，健脾，化痰，宁心安神。0004香豆素PACHYMARAN来源于多孔菌科真菌茯苓PORIACOCOSWOLF。有健脾健肾、宁心安神等功效。现代药理学作用表明，香豆素能增强人体免疫功能，提高人体抗病能力，起到防病、延缓衰老的作用。选择适合茯苓的提取方法，最大限度的提取茯苓的有效成分是研究茯苓药理作用的基础。现有两种最新的提取方法，能使水溶性多糖的提取

6、率得到明显的提高。发明内容0005本发明采用的技术方案如下0006一种香豆素的制备方法，其特征在于，以如下的方法制备00071称取茯苓切片后粉碎，加入312倍重量份数的水，回流提取23次，在料液比140，提取温度4095，提取3060MIN/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；00082取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80，静置，过滤，收集沉淀。0009本发明所述的制备方法，其中提取温度为40。0010本发明所述的制备方法，其中提取时间为30MIN/次。0011本发明所述的制备方法，其中加入95乙醇。说明书CN102060824ACN102060829A2/4页4001

7、2本发明的目的是实验设计优化香豆素的提取方法和工艺条件。方法利用单因素实验优化香豆素的提取方法，在单因素实验的基础上利用响应表面实验设计考察碱法提取过程中碱浓度、提取时间、料液比对多糖提取量的影响。结果香豆素中多糖的最佳提取方法为碱法提取，其提取条件可用回归方程Y78915249X1354X128375X20885X227333X1X2描述。结论最佳提取方法为碱法，最佳提取工艺条件为NAOH浓度084MOL/L，时间889H，料液比1150。0013器材00141、A主要仪器UV752型可见紫外分光光度计；JJ系列电子天平；赛多利斯BS系列电子天平；HHS型电热恒温水浴锅；HS10260D超声

8、波提取器；XYJ802离心沉淀机。0015B香豆素云南思茅地区加工茯苓白块所切削的茯苓皮干品，粉碎备用。0016C主要试剂浓硫酸、氢氧化钠、苯酚、无水葡萄糖均为国产分析纯。苯酚溶液称取苯酚6G，加水至100ML即得。葡萄糖标准液精密称取105下干燥恒重的葡萄糖1003MG加蒸馏水溶解并定容至100ML。00172、方法与结果0018A香豆素测定采用硫酸苯酚的方法测定。0019B水提法称取一定量茯苓皮，在料液比一定的条件下，考察提取次数、提取时间和提取温度与香豆素提取量的关系。0020C超声波提取法称取一定量茯苓皮，在料液比一定的条件下，考察超声提取时间和提取温度与多糖提取量的关系。0021D碱

9、法提取多糖称取一定量香豆素，在料液比一定的条件下，室温提取30MIN，考察碱浓度与多糖提取量的关系。0022E水提法00231提取次数的考察称取一定量香豆素，在料液比140，提取温度95，提取30MIN/次的条件下，考察提取次数与香豆素提取量的关系。茯苓皮提取的多糖量随累积提取次数的增加而增加，但从第2次开始提取的多糖量并迅速减小，综合考虑提取过程中的能耗、水耗等因素，宜采用一次提取。00242提取时间的考察称取一定量茯苓皮，在料液比140，提取温度95，提取一次的条件下，考察不同提取时间与多糖提取量的关系。在1020MIN之间，香豆素多糖的提取量随提取时间的增加快速增加，20MIN之后则变化

10、缓和，故提取时间以2030MIN为宜。00253提取温度的考察称取一定量茯苓皮，在料液比140，提取时间30MIN，浸提一次的条件下，考察提取温度与多糖提取量的关系。茯苓皮中多糖提取量在2040之间随提取温度的增加而增加，温度高于40后则呈下降趋势，6080之间变化不大，在沸腾状况95下原料处于不断运动状态，其多糖提取量有所上升，提示搅拌使茯苓皮不断运动有利于多糖的提取，故宜选用40搅拌提取。0026F超声波提取法00271超声提取时间的考察称取一定量茯苓皮，在料液比140，超声频率40KHZ，超声提取一次的条件下，考察超声提取时间与多糖提取量的关系。，茯苓皮多糖提取量随超声时间的增加而增大，

11、当提取时间达到30MIN后，提取时间对提取量的影响减小，曲线变得较说明书CN102060824ACN102060829A3/4页5平缓。故一次超声提取的时间以30MIN为宜。00282超声提取次数的考察称取一定量茯苓皮，在料液比140，超声频率40KHZ，超声提取30MIN/次的条件下，考察超声提取次数与多糖提取量的关系。0029G碱法提取称取一定量茯苓皮，在料液比1200，室温浸提30MIN条件下，考察碱浓度与多糖提取量的关系。结果表明茯苓皮多糖提取量在NAOH浓度02505MOL/L之间呈上升趋势，当浓度大于05MOL/L以后呈下降趋势，故宜选NAOH浓度为05MOL/L为中心点进行二次旋

12、转正交组合实验。0030H二次旋转正交组合实验为了全面分析碱提过程中各因素交互作用对茯苓皮提取过程的影响，在料液比1150条件下，本研究采用23旋转响应表面实验设计进行，影响因子为NAOH浓度、浸提时间，结果指标为茯苓皮的多糖提取量。实验结果采用二次回归分析和方差分析，根据回归方程得出适宜的碱提工艺条件。0031用两因子二次旋转正交组合实验统计程序对表2结果进行回归分析和方差分析，得到以多糖提取量为指标，以NAOH浓度X1MOL/L和提取时间X2为变量的二次回归方程及其方差分析结果见表3，结果表明茯苓皮多糖碱浸提中，在005水平上对多糖提取量影响显著的因素是X1、X2的一次作用，X2的二次作用

13、及X1X2的交互作用P005。0032香豆素类药物是一类口服抗凝药物。它们的共同结构是4羟基香豆素。同时，双香豆素还可以用于对付鼠害。当初人们在牧场牲畜因抗凝作用导致内出血致死的过程中发现的双香豆素，意识到了这一类物质的抗凝作用，引起了之后对香豆素类药物的研究和合成，从而为医学界提供了多一种重要的凝血药物。0033常见的香豆素类药物有双香豆素DICOUMAROL、华法林WARFARIN，苄丙酮香豆素和醋硝香豆素ACENOCOUMAROL，新抗凝。0034香豆素类药物的作用是抑制凝血因子在肝脏的合成。香豆素类药物与维他命K的结构相似。香豆素类药物在肝脏与维他命K环氧化物还原酶结合，抑制维生素K由

14、环氧化物向氢醌型转化，维生素K的循环被抑制。可以说香豆素类药物是维生素K拮抗剂，或者是竞争性抑制剂参见酶。含有谷氨酸残基的凝血因子II、VII、IX、X的羧化作用被抑制，而其前体是没有凝血活性的，因此凝血过程受到抑制。但它对已形成的凝血因子无效。多糖碱浸提过程中，NAOH浓度X1、浸提时间提X2的一次作用、二次作用、交互作用对多糖提取量影响的数学模型为Y78899152488X1353996X1283726X208847X2273333X1X2。该数学模型的相关系数09677，标准误差37921，方差分析结果显著P005，见表3，可用于预测茯苓皮多糖碱浸提过程中的多糖提取量。各因素对茯苓皮多糖

15、提取量的表面应答图及其等高线图见图8。00353结论0036以香豆素提取量为指标，比较水提法、超声波提取法和碱提取法，茯苓皮中香豆素的提取宜用碱法提取。茯苓皮碱浸提过程中，NAOH浓度X1及浸提时间X2对多糖提取量影响的数学模型为Y78899152488X1353996X1283726X208847X2273333X1X2。通过方程预测得到最佳碱浸提工艺条件为NAOH浓度X1084MOL/L，时间X2889H。此条件下香豆素多糖提取量达5499。说明书CN102060824ACN102060829A4/4页6具体实施方式0037以下实施例用来帮助理解本发明，并且不用于也不应被解释为以任何方式对

16、所列出的权利要求中发明的限制。其中原料可以参考实施例的方法制备或在市面上购买。0038实施例100391称取香豆素500G切片后粉碎，加入12倍重量份数的水，回流提取3次，在料液比140，提取温度40，提取30MIN/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；00402取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入95乙醇，使含醇量达到80，静置，过滤，收集沉淀得到香豆素，茯苓皮中多糖提取量达5499。0041实施例200421称取香豆素500G切片后粉碎，加入10倍重量份数的水，回流提取2次，在料液比140，提取温度80，提取60MIN/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；00432取提取液减压蒸馏浓缩，浓

17、缩液边搅拌边加入95乙醇，使含醇量达到80，静置，过滤，收集沉淀得到香豆素，茯苓皮中多糖提取量达559。0044实施例30045在每1000毫升注射液中加入香豆素500MG，吐温8030G，余量为氯化钠等渗溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。0046实施例40047在每1000毫升注射液中加入香豆素150MG，吐温8010G，余量为等渗氯化钾溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。0048实施例50049在每1000毫升注射液中加入香豆素200MG，吐温8015G，余

18、量为等氯化镁渗溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。0050实施例60051在每1000毫升注射液中加入香豆素280MG，吐温8025G，余量为注射用水。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。0052实施例70053在每1000毫升注射液中加入香豆素300MG，吐温8018G，余量为乳酸钠等渗溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。0054实施例80055在每1000毫升注射液中加入香豆素400MG，吐温8028G，余量为注射用水。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。说明书CN102060824A