野菊花类胡萝卜素类色素的提取和制备方法.pdf

1、(10)申请公布号 CN 101967302 A(43)申请公布日 2011.02.09CN101967302A*CN101967302A*(21)申请号 201010515845.6(22)申请日 2010.10.22C09B 61/00(2006.01)(71)申请人南京农业大学地址 210095 江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处(72)发明人郭巧生 申海进 刘丽(54) 发明名称野菊花类胡萝卜素类色素的提取和制备方法(57) 摘要本发明涉及超声提取野菊花类胡萝卜素类色素的提取和制备方法，属于食品加工学领域，专用于野菊花深度加工。其原料和工艺为，野菊花杀青、干燥，低温密封储藏，过10

2、0目筛后以乙醚为提取溶剂，液料比(v/w)40/1，35下提取1.0h；抽滤，35的水浴旋转蒸发脱去乙醚，-70冷冻后再经离心冷冻浓缩，得乙醚提取物。解析后发现野菊花乙醚提取物中游离-胡萝卜素占总类胡萝卜素的1.04，总-胡萝卜素占总类胡萝卜素1.53，游离-胡萝卜素占总-胡萝卜素的67.97，此外还有金属元素等。本发明为野菊花的深度加工提供了一种新方法，可操作性强，安全性好，重复性好。 (51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页CN 101967302 A 1/1页21.野菊花类胡萝卜素类色素的提取和制备方法

3、，其特征在于由以下步骤组成：(1)野菊花类胡萝卜素类色素的提取方法原料：野菊花Chrysanthemum indicum L；杀青：将野菊花在采后的30min内，105杀青3min；干燥：杀青后于40通风干燥；粉碎：用高速粉碎机将野菊花粉碎，过100目筛备用；提取：将上述粉碎后的野菊花以乙醚为提取溶剂，体积/重量v/w的液料比为40/1，35下提取1.0h；(2)野菊花类胡萝卜素类色素的制备方法将(1)中提取液抽滤，于35的水浴旋转蒸发脱去乙醚，-70冷冻后再经离心冷冻浓缩，-70冷冻真空干燥，得野菊花类胡萝卜素类色素，-20避光保存备用。2.按照权利要求1所述提取、制备方法获得的野菊花类胡萝

4、卜素类色素。权 利 要 求 书CN 101967302 A 1/5页3野菊花类胡萝卜素类色素的提取和制备方法技术领域0001 本发明涉及野菊花类胡萝卜类色素的提取及制备方法，属于食品加工学领域，专用于野菊花类胡萝卜素色素的提取和制备。背景技术0002 野菊(Chrysanthemum indicum L.)or(Dendranthema indicum(Linn)Des Moul.)为菊科菊属多年生草本植物，头状花序在秋、冬二季花初开放时采摘，直接晒干或蒸后晒干入药，药材名野菊花(Flos Chrysanthemi indici)，中国药典一部(2005版)收录。以完整，体轻，色黄，香气浓者为

5、佳。0003 类胡萝卜素是植物中广泛分布的色素之一。药用植物野菊开黄色小花，过往研究表明花的黄颜色常由类胡萝卜素造成，也有由类黄酮引起的，一朵花可同时含类胡萝卜素和类黄酮。0004 类胡萝卜素(Carotenoids)常显黄色、橙色或红色，是一类具生物活性的烯萜类化合物的总称，据化学结构和溶解性分为两类：一为胡萝卜素类(Carotenes)，如-胡萝卜素(-carotene)、-胡萝卜素(-carotene)、-胡萝卜素(-carotene)、番茄红素(Lycopene)等；二为叶黄素类(Xanthophylls)，如玉米黄素(Aeaxanthin)、虾青素(Astaxanthin)、叶黄素(

6、Lutein)、辣椒红素(Capsanthin)、隐黄质(Cryptoxanthin)等。0005 不同溶剂提取野菊花获得的提取液，在480-400nm内均有三个峰。图1显示，丙酮/石油醚1/1、甲醇/二氯甲烷1/1、甲醇/乙酸乙酯/石油醚1/1/1、甲醇/丙酮1/1、三氯甲烷、正己烷/丙酮/乙醇2/1/1、乙醚等溶剂的提取效果较好。在单因素实验结果基础上，用正交设计助手II V3.1中L9(34)，对色素的提取条件进行优化以获得野菊花类胡萝卜类色素的最佳提取工艺。发明内容0006 技术问题本发明的目的在于提供一种野菊花类胡萝卜素类色素的提取和制备方法，为野菊的深度开发利用提供原材料保障。00

7、07 技术方案：本发明的实施方案如下：0008 1.野菊花类胡萝卜素类色素的提取方法，包括：0009 (1)原料：野菊花，材料洁净，净度99；0010 (2)杀青：将野菊花在采后的30min内，105杀青3min；0011 (3)干燥：杀青后于40通风干燥；0012 (4)粉碎：用高速粉碎机将野菊花粉碎，过100目筛备用；0013 (5)提取：将上述粉碎后的野菊花以乙醚为提取溶剂，液料比(v/w)40/1，35水浴中进行1.0h的提取。0014 2.野菊花类胡萝卜素类色素的制备方法，包括：0015 (1)除杂：将1中所得提取液抽滤除杂；说 明 书CN 101967302 A 2/5页40016

8、 (2)浓缩：35的水浴旋转蒸发，浓缩除去乙醚；0017 (3)干燥：-70冷冻后，真空冷冻干燥。0018 (4)保存：将上述干燥后的提取物-20避光保存备用。0019 本申请还要求保护按照上述提取、制备方法获得的野菊花类胡萝卜素类色素。0020 野菊花类胡萝卜素类色素的提取方法，根据单因素实验结果(料液比、提取温度、提取时间等)，运用正交设计助手II V3.1中L9(34)，对色素的提取条件进行优化以获得野菊花类胡萝卜类色素的最佳提取工艺，最佳参数优化为乙醚，液料比(v/w)40/1，35水浴中提取1.0h。0021 有益效果：本发明选用正交统计设计，通过正交设计助手II V3.1对试验数据

9、进行回归分析，开展野菊花类胡萝卜类色素提取方法和主要参数的确定并对提取方法进行优化。与其他提取技术相比，其优点是：0022 (1)提取溶剂选择(表1)，虽然丙酮/石油醚1/1、甲醇/二氯甲烷1/1、甲醇/乙酸乙酯/石油醚1/1/1、甲醇/丙酮1/1、三氯甲烷、正己烷/丙酮/乙醇2/1/1、乙醚等溶剂的提取效果较好，但甲醇和三氯甲烷具中等毒性，二氯甲烷有低毒和麻醉性，丙酮的沸点(57)超过了胡萝卜素的稳定极值40，医疗上常用的乙醚的沸点为35，符合要求。综合考虑溶剂的安全性、色素脱溶的方便性和热稳定性以及商业生产和经济有效原则，本发明选乙醚为提取溶剂。0023 表1不同溶剂提取野菊花提取液特征峰

10、处的吸光值0024 0025 说 明 书CN 101967302 A 3/5页50026 注：a表中数据为3重复的平均值。0027 (2)选择了适宜的提取条件(表2)，运用正交设计助手II V3.1中L9(34)，对色素的提取条件进行优化以获得野菊花类胡萝卜类色素的最佳提取工艺。0028 表2类胡萝卜素类色素提取正交试验及结果0029 0030 注：a测定结果为3重复的平均值。0031 (3)本发明提供的类胡萝卜素类色素的提取和制备方法，生产上可用于对野菊花说 明 书CN 101967302 A 4/5页6类胡萝卜素类的提取制备。附图说明0032 图1为-胡萝卜素标准品的液相色谱图0033 图

11、2为野菊花类胡萝卜类色素提取物的液相色谱图具体实施方式0034 安徽省金寨县野菊花类胡萝卜素类色素提取：0035 (1)原料：安徽省金寨县野菊花，材料洁净，净度99；0036 (2)杀青：将野菊花在采后的30min内，105杀青3min；0037 (3)干燥：杀青后于40通风干燥；0038 (4)粉碎：用高速粉碎机将野菊花粉碎，过100目筛备用；0039 (5)提取：将上述粉碎后的野菊花以乙醚为提取溶剂，液料比(v/w)40/1，在35水浴中提取1.0h；0040 (6)除杂浓缩：将(5)中所得提取液抽滤除杂，35的水浴旋转蒸发，浓缩至无醚味；0041 (7)干燥：-70冷冻后，真空冷冻干燥后

12、-20避光保存备用。0042 所提取的提取物显色鉴定：石油醚试验显亮黄色、浓硫酸试验呈暗蓝-蓝紫色、浓盐酸试验呈暗蓝色、浓硝酸试验呈蓝-绿色，共同说明野菊花中有类胡萝卜素类化合物(Carotenoid-type)的存在。0043 二氯甲烷提取液的特征吸收峰在419、447、476nm，初步指认野菊花中类胡萝卜素可能为叶黄素、玉米黄素、-胡萝卜素、-胡萝卜素等；三氯甲烷提取液的特征吸收峰在424、450、477nm，初步鉴定野菊花中类胡萝卜素可能为叶黄素、玉米黄素、-胡萝卜素、-胡萝卜素、-胡萝卜素、番茄红素等。0044 提取物成分鉴定0045 标准品：-胡萝卜素(76K70511，95)购自S

13、igma；金属元素标准液购自冶金部钢铁研究总院国家钢铁材料测试中心；色谱级正己烷购自Merck；色谱级乙腈和二氯甲烷购自Honeywell。0046 供试样品液制备：0.1g野菊花样品，加入50ml正己烷/丙酮/乙醇(50/25/25)提取液(含0.1BHT)，200r/min室温下避光振荡提取60min，4条件下6500r/min离心5min，收集上清液，在450nm下测定溶液吸光值。以-胡萝卜素为标品，吸光值外标法定量。野菊花类胡萝卜素类色素提取物直接加正己烷/丙酮/乙醇(50/25/25)提取液(含0.1BHT)，其余按上述测定方法。0047 测定方法：0048 游离-胡萝卜素在野菊花总

14、胡萝卜素提取液或乙醚提取物溶液(正己烷/丙酮/乙醇(50/25/25)，含0.1BHT)中，加入10氯化钠溶液，水相反复用正己烷萃取，合并正己烷相，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发至一定体积，0.45m膜过滤后备用。在Ettan LC上，选用Shim-packVP-ODS C18柱(4.6mm250mm，5m)，流动相：甲醇/乙睛/二氯甲烷/正己烷(15/40/20/20)，流动相中尚含0.1BHT及0.05三乙胺，检测波长：436nm，流速：说 明 书CN 101967302 A 5/5页71.0mL/min，进样量：100L。以-胡萝卜素为标样，峰面积外标法定量。0049 总-胡萝卜素游离-胡萝卜素测定备用液加入20氢氧化钾-甲醇溶液(样/碱2/1，置暗处室温皂化12h后，加入10氯化钠溶液分层，水相反复用正己烷萃取，合并正己烷相，蒸馏水洗至中性，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发至一定体积，定容后0.45m膜过滤，续滤液按游离-胡萝卜素测定方法上样。0050 提取物成分含量：0051 野菊花及其乙醚提取物中类胡萝卜素的含量0052 0053 注：表中数据为3重复的平均值标准偏差。0054 野菊花中游离-胡萝卜素占总类胡萝卜素的1.07，而总-胡萝卜素占总类胡萝卜素1.56，游离-胡萝卜素占总-胡萝卜素的68.59。说 明 书CN 101967302 A 1/1页8图1图2说 明 书 附 图