倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法.pdf

1、10申请公布号CN102311340A43申请公布日20120111CN102311340ACN102311340A21申请号201110187429222申请日20110706C07C69/145200601C07C67/5220060171申请人南京泽朗农业发展有限公司地址211225江苏省南京市溧水县白马镇工业集中区食品园3号72发明人苏刘花54发明名称倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法57摘要本发明涉及倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征是大叶醉鱼草用有机溶剂提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用乙酸乙酯或乙醚萃取，减压浓缩得萃取有机溶剂层，取萃取有机溶剂进行高压硅胶柱层析，

2、用石油醚丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含醉鱼草定A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇水或乙腈水进行洗脱，浓缩相应组分，结晶即得。本发明制备方法简单，制备量大、收率高、产品纯度好，适合工业化生产。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN102311341A1/1页21倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征是将大叶醉鱼草用有机溶剂加热提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用23倍体积量的乙酸乙酯或乙醚萃取，萃取36次，减压浓缩得萃取有机溶剂层，取萃取有机溶剂进行高压硅胶柱层析，用石油醚丙酮梯度

3、洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含醉鱼草定A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇水或乙腈水进行洗脱，浓缩相应组分，结晶即得。2根据权利要求1所述的倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于所述提取所用有机溶剂可选8095乙醇、甲醇、丙酮，提取方法可选回流或超声提取。3根据权利要求1所述的倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于所述高压硅胶柱的柱压为2233MPA，柱内径为150250MM，层析柱径高比为11220，硅胶目数为100400目。4根据权利要求1所述的倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于所述制备液相流动相中甲醇的体积百分比浓度为2070，乙腈

4、的体积百分比浓度为2050。5根据权利要求1所述的倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于所述结晶溶剂为二氯甲烷甲醇、石油醚乙酸乙酯或二氯甲烷乙酸乙酯组合中的任意一种。权利要求书CN102311340ACN102311341A1/3页3倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法技术领域0001本发明属于中药制药领域，涉及倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法。背景技术0002醉鱼草定A（BUDDLEDINA），分子式为C17H24O3，分子量27638，MP9495，为无色片晶，是从醉鱼草科BUDDLEJACEAE大叶醉鱼草BUDDLEJADAVIDIIFRANCH根皮和日本醉鱼草BUDDLEJAJAPONIC

5、AHEMSL根中分离得到的倍半萜化合物。药理研究表明，醉鱼草定A具有毒鱼活性。李顺举等研究发现不同浓度的大叶醉鱼草乙醇提取液对蝗虫的喂毒强度不同，乙醇提取液浓度越高，作用越强烈，效果越好。目前，醉鱼草定A主要采用常压反复硅胶柱层析进行分离，得率低，不但对操作人员人身造成危害，而且有毒溶剂消耗较大。中国专利申请号2010105541640公开的“一种醉鱼草定A的制备方法”采用多级逆流萃取与大孔吸附树脂柱层析结合制备醉鱼草定A，该方法分离效果较差，产品纯度较低。发明内容0003本发明旨在克服上述技术缺陷，提供一种分离效果好、收率高、产品纯度好，适合工业化生产的醉鱼草定A的提取纯化方法。0004为了

6、实现上述目的，本发明采用以下技术方案倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于将大叶醉鱼草用有机溶剂加热提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用23倍体积量的乙酸乙酯或乙醚萃取，萃取36次，减压浓缩得萃取有机溶剂层，取萃取有机溶剂进行高压硅胶柱层析，用石油醚丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含醉鱼草定A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇水或乙腈水进行洗脱，浓缩相应组分，结晶即得。0005所述提取所用有机溶剂可选8095乙醇、甲醇、丙酮，提取方法可选回流或超声提取。0006所述高压硅胶柱的柱压为2233MPA，柱内径为150250MM，层析柱径

7、高比为11220，硅胶目数为100400目。0007所述制备液相流动相中甲醇的体积百分比浓度为2070，乙腈的体积百分比浓度为2050。0008所述结晶溶剂为二氯甲烷甲醇、石油醚乙酸乙酯或二氯甲烷乙酸乙酯组合中的任意一种。0009本发明的有益效果是1、本发明方法通过提取、萃取、柱层析及制备液相分离、结晶等步骤制备醉鱼草定A，耗时短，得率高，操作简单，易于工业化生产。00102、使用特制高压柱层析，上样量大，周期短，分离度好，产品纯度高。00113、本发明为醉鱼草定A的进一步开发利用提供药理原料、理论和实践支持。说明书CN102311340ACN102311341A2/3页40012本发明内容通

8、过以下的实施例作进一步的阐述，但并不限制本发明的范围。具体实施方式0013实施例1取大叶醉鱼草5KG按质量比14加入85的乙醇，80条件下加热回流提取15小时，提取3次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙醚（800ML）萃取6次，减压浓缩得乙醚层85G，将乙醚层85G用甲醇溶解湿法上样至填料200300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为29MPA，柱内径为150MM，层析柱径高比为118，以石油醚丙酮的混合溶剂，依次按体积比1001、1002、1005、10020洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A粗品

9、，制备液相色谱条件是流动相乙腈水（4555），流速15ML/MIN，检测波长280NM。将醉鱼草定A粗品用石油醚乙酸乙酯（51）进一步结晶纯化，得纯度为989的无色结晶产品15G。0014实施例2取大叶醉鱼草5KG按质量比16加入80的丙酮，85条件下加热回流提取2小时，提取2次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙酸乙酯（1200ML）萃取4次，减压浓缩得乙醚层83G，将乙醚层83G用甲醇溶解湿法上样至填料100200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为33MPA，柱内径为250MM，层析柱径高比为120，以石油醚丙酮的混合溶剂，依次按体积比1001、1002、1005、

10、10020洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A粗品，制备液相色谱条件是流动相甲醇水（7030），流速20ML/MIN，检测波长280NM。将醉鱼草定A粗品用二氯甲烷甲醇（61）进一步结晶纯化，得纯度为987的无色结晶产品18G。0015实施例3取大叶醉鱼草10KG按质量比14加入90的乙醇，75条件下超声提取15小时，提取3次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙酸乙酯（2000ML）萃取3次，减压浓缩得乙醚层182G，将乙醚层182G用甲醇溶解湿法上样至填料300400目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为

11、22MPA，柱内径为200MM，层析柱径高比为115，以石油醚丙酮的混合溶剂，依次按体积比1001、1002、1005、10020洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A粗品，制备液相色谱条件是流动相甲醇水（6040），流速35ML/MIN，检测波长280NM。将醉鱼草定A粗品用石油醚乙酸乙酯（31）进一步结晶纯化，得纯度为988的无色结晶产品34G。0016实施例4取大叶醉鱼草10KG按质量比15加入95的甲醇，80条件下超声提取1小时，提取2次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙醚（1600ML）萃取

12、5次，减压浓缩得乙醚层176G，将乙醚层176G用甲醇溶解湿法上样至填料200300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为26MPA，柱内径为220MM，层析柱径高比为117，以石油醚丙酮的混合溶剂，依次按体积比1001、1002、1005、10020洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼说明书CN102311340ACN102311341A3/3页5草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A粗品，制备液相色谱条件是流动相乙腈水（2773），流速50ML/MIN，检测波长280NM。将醉鱼草定A粗品用二氯甲烷乙酸乙酯（41）进一步结晶纯化，得纯度为986的无色结晶产品36G。说明书CN102311340A