增加新种树木成活率复合生物菌剂及制备方法.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910366038.3 (22)申请日 2019.05.05 (71)申请人 中铁十八局集团有限公司 地址 300350 天津市津南区双港乡 申请人 丁健 (72)发明人 丁健蒋世杰李恩波陈涛 萧利祥 (74)专利代理机构 北京天奇智新知识产权代理 有限公司 11340 代理人 龙涛 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种增加新种树木成活率复合生物菌剂

2、及 制备方法 (57)摘要 一种树木专用复合生物菌剂及制备方法属 于生物菌剂技术领域， 采用A菌、 B菌二种复合有 益菌群组成， 菌种在种子罐中进行扩繁培养； 培 养温度32， 种子罐培养24小时后， 移入发酵罐 进行发酵培养； 培养温度30-37， 培养50-72小 时； 待菌株形成率达到80以上发酵完毕， 得菌 液。 该菌液不仅促进植物根系发达， 生长枝繁叶 茂， 并且通过有益微生物的天然抗菌性和抗病性 来保护植物免受病菌的侵害、 增强植物的抗逆 性， 减少病虫害。 因而可减少化学肥料与农药的 使用和残留， 能有效的修复环境、 改良土壤、 提高 产量和增加品质。 权利要求书1页 说明书6页

3、 CN 110117561 A 2019.08.13 CN 110117561 A 1.一种生物菌剂， 其采用A菌和B菌构成， 其中A菌中国微生物菌种编号： 枯草芽孢杆菌 BNCC109047， B菌中国微生物菌种编号： 凝结芽孢杆菌BNCC338315， A菌、 B菌在相同浓度的条 件下重量分数比例为1:6。 2.如权利要求1所述的生物菌剂的生产制备办法， 是将A菌、 B菌发酵制备成为菌液， 而 后混合制成树木专用复合生物菌剂， 其中A菌、 B菌载相同浓度条件下重量分数比例为1:6。 3.一种树木专用复合生物菌剂及生产制备办法， 其具体步骤如下； (1)菌种培养： 将培养基分装于试管中， 装

4、入10ml培养基， 常规方法灭菌； 将A菌种和B菌 种分别接入单独的斜面培养基， 置于37恒温培养箱中， 培养24小时； (2)种子液制备： 将培养基分装于500ml三角瓶中， 每瓶装100ml， 灭菌， 无菌条件下将斜 面培养菌种进行振荡培养， 培养温度30-37， 摇床转速100-150r/min， 恒温培养24小时； (3)种子罐培养： 将培养好的种子液接入种子罐中进行扩繁培养； 培养温度30-37， 种 子罐培养24小时后， 移入发酵罐进行发酵培养； (4)发酵罐培养： 将培养好的菌种接入发酵罐中， 进行发酵； 培养温度30-37， 培养60- 72小时， 发酵完毕， 得菌液； 其中A

5、菌中国微生物菌种编号： 枯草芽孢杆菌BNCC109047， B菌中国微生物菌种编号： 凝 结芽孢杆菌BNCC338315； 其中种子液培养基中培养基配方为牛肉膏4g、 营养琼脂6g、 添至2葡萄糖500ml； 发酵培养基配方是牛肉膏2、 营养琼脂2+酵母粉1+2葡萄糖至500ml； 斜面培养基组成分别为： 枯草芽孢杆菌BNCC109047： 培养用的斜面培养基组成： 牛肉膏3.0g， 蛋白胨10.0g， NaCl5.0g， 5mg MnSO4H2O， 琼脂20.0g， 蒸馏水1.0L， pH7.0。 121， 15min。 凝结芽孢杆菌BNCC338315： 培养用斜面培养基组成： 蛋白胨5.

6、0g， 牛肉浸取物3.0g， NaCl 5.0g， 琼脂15.0g， 蒸馏水1.0L， pH7.0。 4.权利要求1的菌剂， 或权利要求2和3方法制备得到的菌剂的使用方法， 一棵树地用 200ml用1000倍的水混合， 均匀浇根； 在树木生长期每隔30-45天喷施一次， 每个生长期至少 施用3次。 权利要求书 1/1 页 2 CN 110117561 A 2 一种增加新种树木成活率复合生物菌剂及制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种生物菌剂， 即增加新种树木成活率复合生物菌剂。 背景技术 0002 对于树木的一些病虫害的防治采取一些措施， 采取一些药物治疗手段， 譬如喷洒 一些杀菌剂、

7、杀虫剂， 但是， 这对于空气、 土壤、 地下水体都有极大的破坏， 有一些影响会是 长远的。 0003 由于树木种植之前是农田， 长期应用化肥与农药， 导致土壤板结， 通透性减弱， 容 易引发植物的多种病害。 造成树木生长不好， 已引起人们的广泛重视， 尽管化学农药在防病 有一定的效果， 但长期使用不仅能使作物产生耐药性， 而且还留有残留污染。 生态环境日益 恶化。 0004 化肥、 农药对促进树木根系生长几乎是无效， 不能从根本上解决树木生长的问题， 并且随着国家对高残留、 高毒农药的限制使用及人们健康意识的逐渐加强， 用化学方法解 决促进树木生长已经走到尽头。 0005 采用生物防治技术，

8、不仅抑制与消除导致树木生病的病原菌， 还可以减少化肥的 施用量， 活化土壤， 分解被土壤固定的养分， 分解土壤中矿物化的磷、 钾、 钙等营养素， 从而 提高植物对自然界中N、 P、 K吸收与利用； 使能量立体化汇集， 促进土壤团粒化， 改善土壤结 构， 提高土壤的保水性和透气性能。 同时在树木生长和繁殖过程中， 可以产生植物生长素， 刺激作物的有效生长； 其次微生物的菌群在生长繁殖过程中能有效抑制有害微生物的繁 殖； 多种微生物菌群是复合体， 是无毒、 无害、 经济、 环保的新型有机活体微生物群落， 是修 复土壤、 恢复自然、 还原生态、 生产健康有机产品的最佳选择。 0006 CN10271

9、5058A中公开了一种提高园林植物移栽成活率的方法， 属于园林植物保护 技术领域。 包括以下步骤： 1)将菌根菌、 木屑、 蔗糖、 红薯粉、 磷酸氢二钾、 生长激素混合均匀 制得菌根菌剂； 2)将上述菌根菌剂与水混合， 加入士壤调成泥浆状,将苗木根部插入浸泡进 行处理； 或将药剂稀释后浇灌或喷雾苗木根部； 每次处理8-15h， 共处理2-4次。 虽然其生称 具有促进树木萌生新根新枝、 促进幼苗的主根伸长和加粗、 侧根增多等多种功效， 但是由于 其并没有公开菌根菌就是是何种菌， 并且本领域也也公知即使同一种菌， 其不同的株系在 效果上也可能存在这千差万别， 就像都是大肠杆菌一样， 其发酵生产目的

10、产物的量也是各 不相同的， 因此， 该效果无法重复再现。 0007 本发明提供前期无数的实验以及优化菌系， 发明了二种特定的菌按照一定的比例 投放可以实现增加新种树木成活率的效果， 因此， 具有极大的社会效益和应用前景。 发明内容 0008 本发明的目的是针对上述问题， 提供一种能够改善土壤有机物质、 营养均衡、 肥效 确切； 促进树木生长的树木专用复合生物菌剂及生产制备方法。 0009 本发明提出了一种树木专用复合生物菌剂及生产制备办法， 本发明的技术解决方 说明书 1/6 页 3 CN 110117561 A 3 案是A菌、 B菌混合制成树木专用复合生物菌剂， 其中A菌、 B菌重量分数比例

11、为1:6。 0010 本发明选择的菌种分别如下： 0011 A菌中国微生物菌种编号： 枯草芽孢杆菌BNCC109047 0012 B菌中国微生物菌种编号： 凝结芽孢杆菌BNCC338315 0013 上述二种菌种可按菌种编号， 向中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心 购买。 0014 种子液培养基中培养基配方为牛肉膏4g、 营养琼脂6g、 添至2葡萄糖500ml； 0015 发酵培养基配方是牛肉膏2、 营养琼脂2+酵母粉1+2葡萄糖至500ml； 0016 斜面培养基组成分别为： 0017 枯草芽孢杆菌BNCC109047： 培养用的斜面培养基组成： 牛肉膏3.0g， 蛋白胨10.0g，

12、 NaCl5.0g， 5mg MnSO4H2O， 琼脂20.0g(液体培养基不含)， 蒸馏水1.0L， pH7.0。 121， 15min。 0018 凝结芽孢杆菌BNCC338315： 培养用斜面培养基组成： 蛋白胨5.0g， 牛肉浸取物 3.0g， NaCl 5.0g， 琼脂15.0g(液体培养基不含)， 蒸馏水1.0L， pH7.0。 0019 本发明的技术解决方案是： 一种树木专用复合生物菌剂及生产制备办法， 其具体 步骤如下； 0020 (1)菌种培养： 将培养基分装于试管中， 装入10ml培养基， 常规方法灭菌； 将菌种接 入斜面培养基， 置于37恒温培养箱中， 培养24小时； 0

13、021 (2)种子液制备： 将培养基分装于500ml三角瓶中， 每瓶装100ml， 灭菌， 无菌条件下 将斜面培养菌种进行振荡培养， 培养温度30-37， 摇床转速100-150r/min， 恒温培养24小 时； 0022 (3)种子罐培养： 将培养好的种子液接入种子罐中进行扩繁培养； 培养温度30-37 ， 种子罐培养24小时后， 移入发酵罐进行发酵培养； 0023 (4)发酵罐培养： 将培养好的菌种接入发酵罐中， 进行发酵； 培养温度30-37， 培 养60-72小时， 发酵完毕， 得菌液。 0024 使用方法： 一棵树地用200ml用1000倍的水混合， 均匀浇根； 在树木生长期每隔30

14、- 45天喷施一次， 每个生长期(8个月左右)至少施用3次； 另外也可以用上述时间、 与农家肥混 合使用， 效果更佳， 水量根据具体情况加入。 进行叶面喷施对保花、 保果、 防病有较好的效 果。 0025 有益效果： 0026 本发明是去除与预防树木红锈病的首选， 化学肥料的有效替代产品。 由复合有益 菌群组成避免单一菌群对单一元素有效。 活菌含量高， (国家标准1毫升含活菌2亿个， 树木 专用复合生物菌剂1毫升含活菌80亿个)； 微生物能有效去除与预防树木红锈病， 对红锈病 病原菌有极大的去除与抑制作用。 0027 并且分解与吸收环境中存在的氮、 磷、 钾， 微生物菌群的繁殖代谢物也为环境提

15、供 可吸收利用的有机质， 通过刺激根系的生长和营养成分的吸收， 促进植物根系发达， 生长枝 繁叶茂， 并且通过有益微生物的天然抗菌性和抗病性来保护植物免受病菌的侵害、 增强植 物的抗逆性， 减少病虫害。 因而可减少化学肥料与农药的使用和残留， 能有效的修复环境、 改良土壤、 提高产量和增加品质。 说明书 2/6 页 4 CN 110117561 A 4 0028 下面将结合实施例、 试验例对本发明的实施方式作进一步详细描述。 0029 实施例1培养基的配置 0030 按照下述培养基组成， 配制相应的培养基。 具体培养基组成如下： 0031 (1)种子液培养基中培养基配方为牛肉膏4g、 营养琼脂

16、6g、 添至2葡萄糖500ml； 0032 (2)发酵培养基配方是牛肉膏2、 营养琼脂2+酵母粉1+2葡萄糖至500ml； 0033 (3)斜面培养基组成分别为： 0034 (i)枯草芽孢杆菌BNCC109047： 培养用的斜面培养基组成： 牛肉膏3.0g， 蛋白胨 10.0g， NaCl5.0g， 5mg MnSO4H2O， 琼脂20.0g(液体培养基不含)， 蒸馏水1.0L， pH7.0。 121 ， 15min。 0035 (ii)凝结芽孢杆菌BNCC338315： 培养用斜面培养基组成： 蛋白胨5.0g， 牛肉浸取物 3.0g， NaCl 5.0g， 琼脂15.0g(液体培养基不含)，

17、 蒸馏水1.0L， pH7.0。 0036 实施例2发酵菌液的制备 0037 培养基采用实施例1的培养基进行制备 0038 (1)菌种培养： 将培养基分装于试管中， 装入10ml培养基， 常规方法灭菌； 将菌种A 和B菌种分别接入斜面培养基， 置于37恒温培养箱中， 培养24小时； 0039 (2)种子液制备： 将培养基分装于500ml三角瓶中， 每瓶装100ml， 灭菌， 无菌条件下 将斜面培养菌种进行振荡培养， 培养温度37， 摇床转速100-150r/min， 恒温培养24小时； 0040 (3)种子罐培养： 将培养好的种子液接入种子罐中进行扩繁培养； 培养温度30-37 ， 种子罐培养

18、24小时后， 移入发酵罐进行发酵培养； 0041 (4)发酵罐培养： 将培养好的菌种接入发酵罐中， 进行发酵； 培养温度30-37， 培 养60-72小时， 发酵完毕， 得菌液。 调整菌液浓度分别A菌液为： 4*1010个/ml， B菌液为： 4*1010 个/ml。 0042 实施例3田间小区试验 0043 1、 试验材料 0044 树木试验田由河北省雄安新区10亩苗景兼用林种植地(地域代号D-9-3； D-8-2)提 供， 年生分别为白蜡、 国槐、 玉兰、 银杏； 用本发明一种树木专用复合生物菌剂(发酵液)促进 种植树木的生根。 0045 2、 试验设计 0046 将菌液按照1:6的比例进

19、行混合， 随后， 分别对白蜡、 国槐、 玉兰、 银杏进行喷施 (4000ml用150倍的水混合对全株进行均匀喷施)、 喷施+灌施(2000ml用100倍的水混合均匀 喷施并且利用地灌方式进行灌施)、 清水对照。 分别在生长期每隔30天施用一次， 共施用3 次。 0047 3、 田间试验调查结果 0048 通过施树木专用复合生物菌剂， 对树木进行调查， 试验设置了喷施、 喷施加灌施和 清水对照三种施用方式。 试验表明， 树木专用复合生物菌剂对树木成活率效果最好， 单独喷 施的方式效果次之。 施用树木专用复合生物菌剂调查结果见下表： 0049 表一 树木专用复合生物菌剂灌根对树木玉兰的影响： 00

20、50 年份树叶萌发率用菌剂树叶萌发率未用菌剂 说明书 3/6 页 5 CN 110117561 A 5 2018040610085 2018060910079 201806169973 201808159770 201810119669 0051 从表一可以看出， 采用菌剂处理后， 玉兰的树叶萌发率都是达到96以上， 不使用 菌剂的萌发率也只有70-80， 由此可见， 本发明的菌剂能够显著提高玉兰的萌发率。 0052 表二 树木专用复合生物菌剂灌根对树木国槐生长的实验结果： 0053 年份树叶萌发率用菌剂树叶萌发率未用菌剂 2018040610087 2018060910084 2018081

21、69989 0054 从复合生物菌剂灌根对树木国槐生长的实验结果可以看出， 本发明的菌剂能够显 著提高国槐的萌发率。 0055 表三 树木专用复合生物菌剂灌根对树木国槐生长的根的实验结果： 0056 0057 0058 从使用菌剂针对国槐的根的发育结果可以看出， 使用菌剂同样能够显著快速的提 高主根的生长速度， 不仅能够增加根长， 还能够提高根的粗度， 显著的提高了植物的根生 长。 0059 表四 喷施加灌施树木专用复合生物菌剂对树木银杏的实验结果： 说明书 4/6 页 6 CN 110117561 A 6 0060 0061 由于银杏的生长速度非常缓慢， 因此， 树叶的萌发率不高， 但是也能

22、够看出， 使用 了菌剂的萌发率能够得到提高， 并且根的生长速度经过几个月的发展， 也能够看出在生长 速度上存在着差异。 0062 实施例4:复合菌根菌剂对玉兰人工林土壤理化性质的影响 0063 将菌剂按照实施例3的方法进行施用， 研宄复合菌根菌剂对松杉苗根际土壤酸碱 性、 有机质含量和氮、 磷、 钾含量的影响， 结果如表五表明， 与对照相比， 接种复合菌根菌剂 能显著降低玉兰根际土壤pH值、 增加土壤有机质以及碱解氮、 速效磷和速效钾的含量， 从而 明显改善了根际土壤的肥力， 从而促进植物生长。 0064 表五 复合菌根菌剂对玉兰土壤理化性质的影响 0065 0066 0067 P均小于0.0

23、1。 0068 从表五的结果可以看出， 本发明的菌剂能够很好的调节土壤的理化性质， 增加土 壤中的有机物质从而有效的促进玉兰的生长。 0069 另外， 采用本发明的菌剂处理的白蜡、 国槐、 玉兰、 银杏植物红锈病的发病率菌低 于2， 而没有采用菌剂处理的发病率均高于20， 这也说明， 本发明的菌剂具有较好的预 防植物病害的效果。 0070 尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述， 本领域技术人员将会理解。 根 据已经公开的所有教导， 可以对那些细节进行各种修改和替换， 这些改变均在本发明的保 说明书 5/6 页 7 CN 110117561 A 7 护范围之内。 本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。 说明书 6/6 页 8 CN 110117561 A 8