基于气相色谱-质谱法同时检测乳制品中三种单甘酯乳化剂的方法.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010841587.4 (22)申请日 2020.08.20 (71)申请人 南昌大学 地址 330031 江西省南昌市红谷滩新区学 府大道999号 (72)发明人 万益群罗芸鄢爱平刘翻 郭岚 (74)专利代理机构 南昌恒桥知识产权代理事务 所(普通合伙) 36125 代理人 杨志宇 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种基于气相色谱-质谱法同时检测乳制品 中三种单甘酯乳化剂的方法 (5

2、7)摘要 本发明公开了一种基于气相色谱质谱法同 时检测乳制品中三种单甘酯乳化剂的方法， 包括 以下几个步骤： 气相色谱质谱条件； 单棕榈酸甘 油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯的检测； 样品的预处理； 样品的检测。 本发明采用简便的 液液萃取方法， 结合GCMS分析技术， 提供了一 种乳制品中三种单甘酯乳化剂的分析新方法， 仪 器检出限在0.261.20 mg/L范围内， 为乳制品品 质监管提供了一种新的技术手段。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 112014497 A 2020.12.01 CN 112014497 A 1.一种基于气相色谱-质谱法同时检测乳制品中三种单甘酯乳化

3、剂的方法， 其特征在 于： 主要包括以下几个步骤： （1） 气相色谱-质谱条件； （2） 单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯的检测； （3） 样品的前处理； （4） 样品的检测。 2.根据权利要求1所述的基于气相色谱-质谱法同时检测乳制品中三种单甘酯乳化剂 的方法， 其特征在于： 主要包括以下几个步骤： （1） 气相色谱-质谱条件 本发明中所使用的仪器是气相色谱-质谱联用仪 （美国， Agilent公司） ， 包括7080B色谱 系统、 5977MSD和NIST图谱检索库， 色谱条件： 色谱柱： HP-5MS毛细管柱； 升温程序： 初始温度 为60 ， 以30 /min升至270

4、， 3 /min升至285 ； 载气： 高纯氦气； 流速： 1.0 mL/ min； 进样量： 1.0 L； 分流比： 10 1； 进样口温度： 250 ； 质谱条件： 电子轰击 （EI） 离子源； 电子能量： 70 eV； 离子源温度： 230 ； 四极杆温度： 150 ； 溶剂延迟： 6.5 min； 采集方式： 选择离子扫描模式； （2） 单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯的检测 为消除样品基质对分析结果的影响， 本发明采用基质标准曲线进行定量； 以乳制品样 品的CH2Cl2提取液为溶剂， 配置一系列质量浓度的单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂 酸甘油酯混合基质标准工作溶

5、液， 经硅烷化试剂N,O-双 （三甲基硅） 三氟乙酰胺 （含三甲基 氯硅烷） （BSTFA+1%TMCS） 衍生后， 在上述色谱-质谱条件下进行分析， 以峰面积 （y） 对分析物 浓度 （x） 进行线性回归， 得到线性回归方程； 单棕榈酸甘油酯(1-20 mg/L)、 单油酸甘油酯 (5-100 mg/L)和单硬脂酸甘油酯(10-200 mg/L)线性关系良好 （R20.992） ； 三种目标分析 物的检出限 （LOD） 和定量限 （LOQ） 分别在0.261.20mg/L和0.874.01 mg/L范围内； （3） 样品的前处理 准确称取0.5 g左右牛奶样品， 加入5.0 mL水并混匀；

6、加入10.0 mL CH2Cl2进行萃取， 振 荡10 min； 13000 r/min离心10min， 收集下层有机相， 再加入10 .0mL CH2Cl2重复上述萃取 步骤， 合并有机相； 取1.0 mL萃取液氮气吹干， 加入50 L吡啶溶解； 再加入100 L硅烷化试 剂N,O-双 （三甲基硅） 三氟乙酰胺 （含三甲基氯硅烷） （BSTFA+1%TMCS） ， 于70 下反应40 min， 用正庚烷定容至1.0 mL， 即得上机溶液； （4） 样品的检测 准确称取0.5 g左右牛奶样品， 分别添加三个不同浓度水平的单甘酯乳化剂混合标准 溶液， 按上述样品前处理方法对样品进行处理后， 进行

7、GC-MS分析， 计算样品加标回收率。 权利要求书 1/1 页 2 CN 112014497 A 2 一种基于气相色谱-质谱法同时检测乳制品中三种单甘酯乳 化剂的方法 技术领域 0001 本发明属于分析技术领域， 具体涉及一种基于气相色谱-质谱法同时检测乳制品 中三种单甘酯乳化剂的方法。 背景技术 0002 食品乳化剂属于表面活性剂， 能使油与水 “互溶” 。 广泛应用于乳制品、 面包、 糕点、 饼干、 人造奶油、 冰淇淋、 饮料、 巧克力等食品的加工过程中。 0003 乳制品是人类膳食结构中营养成分较高的食物之一， 在其加工过程中往往会加入 一定量的乳化剂以稳定其品质。 目前， 国内外对乳制

8、品中的乳化剂的研究主要集中在乳化 剂乳化性能、 复配型乳化剂配比对乳制品品质的影响等方面。 乳制品中乳化剂含量检测的 研究报道相对较少， 主要包括气相色谱和液相色谱。 这些分析方法存在样品前处理过程复 杂以及检测灵敏度不高等缺陷。 由于乳制品加工过程中所添加的乳化剂量的多少对其品质 的稳定性及安全性有影响， 因此， 有必要建立一种乳制品中乳化剂快速、 简便、 灵敏的分析 新技术。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种快速、 简便、 灵敏的气相色谱-质谱方法以同时检测乳制 品中三种单甘酯乳化剂 （单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯） 。 0005 本发明的技术方案： 一种基于气

9、相色谱-质谱法实现乳制品中三种单甘酯乳化剂 （单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯） 同时测定的分析方法。 乳制品中三种 单甘酯乳化剂 （单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯） 用CH2Cl2提取， 经硅烷化 试剂 （BSTFA+1%TMCS） 衍生后， 进行气相色谱-质谱测定。 0006 本发明主要包括以下几个步骤： 气相色谱-质谱条件； 单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘 油酯和单硬脂酸甘油酯的检测； 样品的预处理； 样品的检测。 0007 一种基于气相色谱-质谱法同时检测乳制品中三种单甘酯乳化剂 （单棕榈酸甘油 酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯） 的分析方法， 主要包括以下

10、几个步骤： （1） 气相色谱-质谱条件 本发明中所使用的仪器是气相色谱-质谱联用仪 （美国， Agilent公司） ， 包括7080B色谱 系统、 5977MSD和NIST图谱检索库， 色谱条件： 色谱柱： HP-5MS毛细管柱； 升温程序： 初始温度 为60 ， 以30 /min升至270 ， 3 /min升至285 ； 载气： 高纯氦气； 流速： 1.0 mL/ min； 进样量： 1.0 L； 分流比： 10 1； 进样口温度： 250 。 质谱条件： 电子轰击 （EI） 离子源； 电子能量： 70 eV； 离子源温度： 230 ； 四极杆温度： 150 ； 溶剂延迟： 6.5 min；

11、 采集方式： 选择离子扫描模式。 0008 （2） 单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯的检测 为消除样品基质对分析结果的影响， 本发明采用基质标准曲线进行定量。 以乳制品样 说明书 1/4 页 3 CN 112014497 A 3 品的CH2Cl2提取液为溶剂， 配置一系列质量浓度的单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂 酸甘油酯混合基质标准工作溶液， 经硅烷化试剂N,O-双 （三甲基硅） 三氟乙酰胺 （含三甲基 氯硅烷） （BSTFA+1%TMCS） 衍生后， 在上述色谱-质谱条件下进行分析， 以峰面积 （y） 对分析物 浓度 （x） 进行线性回归， 得到线性回归方程。 单棕榈酸

12、甘油酯(1-20 mg/L)、 单油酸甘油酯 (5-100 mg/L)和单硬脂酸甘油酯(10-200 mg/L)线性关系良好 （R20.992） 。 三种目标分析 物的检出限 （LOD） 和定量限 （LOQ） 分别在0.261.20mg/L和0.874.01 mg/L范围内。 0009 （3） 样品的前处理 准确称取0.5 g左右牛奶样品， 加入5.0 mL水并混匀； 加入10.0 mL CH2Cl2进行萃取， 振荡10 min。 13000 r/min离心10min， 收集下层有机相。 再加入10 .0mL CH2Cl2重复上述萃 取步骤， 合并有机相。 取1.0 mL萃取液氮气吹干， 加入

13、50 L吡啶溶解； 再加入100 L硅烷化 试剂N,O-双 （三甲基硅） 三氟乙酰胺 （含三甲基氯硅烷） （BSTFA+1%TMCS） ， 于70 下反应40 min， 用正庚烷定容至1.0 mL， 即得上机溶液。 0010 （4） 样品的检测 准确称取0.5 g左右牛奶样品， 分别添加三个不同浓度水平的单甘酯乳化剂混合标准 溶液， 按上述样品前处理方法对样品进行处理后， 进行GC-MS分析， 计算样品加标回收率。 0011 本发明的有益效果： 本发明设计了一种同时检测乳制品三种单甘酯乳化剂的气相 色谱-质谱方法， 可简便、 快速、 灵敏地检测乳制品中的三种单甘酯乳化剂， 为今后的生产、 监管

14、提供了方便， 可满足国内对其生产、 监管的需要。 附图说明 0012 图1为单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯色谱分离图。 0013 （1.单棕榈酸甘油酯(100 mg/L)； 2.单油酸甘油酯(100 mg/L)； 3.单硬脂酸甘油酯 (100 mg/L)） 。 具体实施方式 0014 实施例1： 采用气相色谱-质谱联用仪 （美国， Agilent公司） ， 包括7080B色谱系统、 5977MSD和NIST 图谱检索库。 色谱条件： 色谱柱： HP-5MS毛细管柱； 升温程序： 初始温度为60 ， 以30 / min升至270 ， 3 /min升至285 ； 载气： 高纯氦气；

15、 流速： 1.0 mL/min； 进样量： 1.0 L； 分流比： 10 1； 进样口温度： 250 。 质谱条件： 电子轰击 （EI） 离子源； 电子能量： 70 eV； 离子 源温度： 230 ； 四极杆温度： 150 ； 溶剂延迟： 6.5 min； 采集方式： 选择离子扫描。 三种目 标化合物的质谱检测参数如表1所示。 说明书 2/4 页 4 CN 112014497 A 4 0015 实施例2： 以乳制品的CH2Cl2提取液为溶剂， 配置一系列质量浓度的单棕榈酸甘油酯、 单油酸甘 油酯和单硬脂酸甘油酯混合基质标准工作溶液， 经硅烷化试剂N,O-双 （三甲基硅） 三氟乙酰 胺 （含三甲

16、基氯硅烷） （BSTFA+1%TMCS） 衍生后， 在上述色谱及质谱条件下进行分析， 以峰面 积（y）对 分 析 物 浓 度（x）进 行 线 性 回 归 ， 线 性 方 程 、 检 出限 及 定 量限 见 表 2 。 0016 实施例3： 样品的前处理： 准确称取0.5 g左右牛奶样品， 加入5.0 mL水并混匀； 加入10.0 mL CH2Cl2进行萃取， 振荡10 min。 13000 r/min离心10min， 收集下层有机相。 再加入10 .0mL CH2Cl2重复上述萃取步骤， 合并有机相。 取1.0 mL萃取液氮气吹干， 加入50 L吡啶溶解； 再 加入100 L硅烷化试剂N,O-

17、双 （三甲基硅） 三氟乙酰胺 （含三甲基氯硅烷） （BSTFA+1%TMCS） ， 于70 下反应40 min， 并用正庚烷定容至1.0 mL， 即得上机溶液。 0017 实施例4： 准确称取0.5 g左右酸奶和纯牛奶样品， 分别添加三个不同浓度水平的混合标准单甘 酯溶液， 按上述样品前处理方法对样品进行处理后， 进行GC-MS分析， 计算样品加标回收率 和精密度， 结果见表3。 说明书 3/4 页 5 CN 112014497 A 5 0018 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细说明， 不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。 对于本领域的普通技术人员来说， 可以根据本发明 的技术方案和发明构思， 作出相应改变和替代， 而且性能或用途相同， 都应当视为本发明的 保护范围。 说明书 4/4 页 6 CN 112014497 A 6 图1 说明书附图 1/1 页 7 CN 112014497 A 7